微生物第八章病原学诊断与防治.pptVIP

第八章 病原学诊断与防治 广州医学院 病原生物学教研室 陈 晓 湘 诊断 病原学检测 血清学检测 防治 特异性防治：人工主动免疫、人工被动免疫 非特异性防治：抗生素、抗病毒药物、抗真菌药物 第一节 细菌学诊断 细菌学诊断——检测病原菌及其抗原，产物或核酸 血清学诊断——检测患者血清中特异性抗体 一、病原菌检测 标本采集与送检原则： 根据不同疾病和不同病期，采取不同标本。 无菌操作，避免杂菌污染。 应在使用抗菌药物前采集标本。 尽可能采集病变明显部位的材料。 标本必须新鲜，采集后尽快送检。 送检过程中要采取适当的保存方式。 做好标记，详细填写化验单，保证各环节准确无误。 二、血清学诊断 人体受致病菌感染后，免疫系统产生特异性抗体。抗体的量常随病程而增加，表现为效价（滴度）升高。 用已知的细菌或抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为感染性疾病的辅助诊断。由于一般采取病人血清进行试验，故称为血清学诊断(serological diagnosis)。 血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。 常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。 第二节 病毒学诊断 二、病毒的分离培养与鉴定 （一）病毒的分离 动物接种：选择易感动物及适宜接种部位，观察发病情况 鸡胚培养：不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。 细胞培养：分离病毒最常用的方法 （1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。 （2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞，可用于病毒分离和疫苗生产。 （3）传代细胞—能在体外无限传代的细胞，多由癌细胞或二倍体细胞突变而来，不能用于疫苗生产。 病毒在培养细胞中增殖的指标 细胞的变化 细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、溶解、脱落等） 细胞融合：形成多巨核细胞 包涵体：某些病毒在培养细胞胞浆或核内形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。 红细胞吸附 干扰现象 细胞代谢改变（pH） （二）病毒的数量与感染性测定 （三）新分离病毒的鉴定 核酸类型的测定 理化性状的检测 形态学观察 血清学鉴定 基因测序和生物对比 三、病毒感染的血清学诊断 用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病。 中和试验 补体结合试验 血凝抑制试验 凝胶免疫扩散试验 四、 病毒感染的快速诊断 （一）形态学检查 电镜和免疫电镜——直接观察病毒 普通光镜——观察包涵体 （四） 检测病毒核酸 1 核酸杂交 ?? 斑点杂交（dot hybridization） ?? 原位杂交（in site hybridization） ?? DNA印迹杂交（Southern blot） ?? RNA印迹杂交 （Northern blot） 2 核酸扩增 聚合酶链反应 （polymerase chain reaction，PCR） 连接酶链反应（ligase chain reaction，LCR） 反转录PCR（Reverse transcrptase PCR，RT-PCR） 3 基因芯片技术（gene chip） 第三节 真菌学诊断 第四节 特异性预防与治疗 一、人工主动免疫(artificial active immunity) 将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。 疫苗 死疫苗 活疫苗 新型活疫苗 基因工程疫苗 重组载体疫苗 合成疫苗 亚单位疫苗 DNA疫苗 转基因植物疫苗 治疗性疫苗 类毒素 外毒素 0.3%~0.4%甲醛 类毒素 二、人工被动免疫(artificial passitive immunity) 抗毒素 抗菌血清 胎盘丙种球蛋白、血清丙种球蛋白 其他免疫制剂 两种人工免疫的比较 三、细菌感染的治疗 抗菌药物 人工合成化学药物 微生物合成的抗生素 （一）抗菌药物种类 按生物来源分 按化学结构和性质分 （二）主要作用机制 影响细胞壁合成 影响细胞膜功能 影响细菌蛋白合成 影响细菌核酸代谢 四、病毒感染的治疗 抗病毒化学制剂 核苷类药物——抑制病毒基因复制 ——抑制病毒基因转录 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他药物（金刚烷胺） 干扰素及干扰素诱生剂治疗 干扰素 干扰素诱生剂 基因治疗 五、真菌的治疗 卫生、干燥、消毒（福尔马林）