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基因工程相关问题解析 复兴中学 车未艾 问题一：关于克隆载体与基因表达载体 （一）克隆载体 用来克隆和扩增DNA片段的载体，具有3点特性： ⑴ 能够在受体细胞复制； ⑵ 带有药物抗性基因，便于筛选； ⑶ 可导入受体细胞。 （二）表达载体 除具有克隆载体所具有的性质外，还带有表达构件——转录和翻译所必须的DNA顺序。 是否含有表达系统元件，即启动子—核糖体结合位点--转录终止信号，这是用来区别克隆载体和表达载体的标志。 克隆载体——pBR322质粒 ① 4363 bp ② 含一个复制点 ③ 含一个抗氨卞青霉素标 记(ampR) ④ 一个抗四环素标记 (tetR) ⑤ ampR和tetR基因内各有一些限制酶的酶切位点，供外源基因插入 当外原基因插入抗药基因位点时，AmpR→Amp敏感(AmpS )、TetR→Tet敏感(TetS). 真核生物基因表达载体 表达载体模式图 问题二：关于构建基因文库 构建cDNA文库的步骤：提取某种生物发育某个时期的mRNA→反转录成互补DNA→与载体连接→侵染大肠杆菌→建立部分基因文库 如何从基因文库中分离目的基因？ 1）探针序列来自基因产物蛋白质 2）同源序列杂交 问题二：关于构建基因文库 分离目的基因 的mRNA 逆转录生成cDNA单链 水解去除mRNA， 合成cDNA双链 水解回折处单链 得到平端双链cDNA 导入宿主细胞克隆,构建cDNA文库 GenBank flat file: LOCUS DQ673108 365 bp DNA linear PLN 11-JUL-2006DEFINITION Homaliodendron microdendron 18S ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, complete sequence; and 5.8S ribosomal RNA gene, partial sequence. AUTHORS Che,W., Du,G. and Wu,P. TITLE Direct Submission JOURNAL Submitted (05-JUN-2006) Biology, Capital Normal University 1 acctgtgaac ctgcggaagg atcattgcac acacgagttg cagccaaccc gcggcgaacg 61 aacacattgt ccctttcggt gggtcgtggc gccgcgcggc gtggcggccg gccactccct 121 ttgtcgtcac gagctcgctc gcgcgcggcg ttgggtttcc acgcgatgcc ttcaccttga 181 ccgaatgact cagtccctcg acttcgtagg aggattggga gttccgtccc ccttggcgcg 241 cttcgcttct taagggggtg ggcgtggtta ccacccgaat tgttaaaacg taatccaaaa 301 caactctcag caacggatat cttggctctt gcaacgatga agaacgcagc gaaatgcgat 361 acgta 例题分析 （2009年天津）为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。下图是获取植酸酶基因的流程。据图回答： ① 图中基因组文库____________（小于/等于/大于）cDNA文库。 ② B过程需要的酶是______________；A、C过程中__________（可以/不可以）使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。 ③ 目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中___________和_____________为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是_______________________。 问题三：关于重组DNA的检测 （一）平板筛选 （二）限制酶切图谱筛选 （三）PCR筛选重组体 （四）分子杂交技术 （一）平板筛选 是指利用载体的遗传性标记直接筛选的方法。 如具有抗药性