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HPLC-MS法测定人血浆中罗红霉素浓度 【摘要】 目的 建立液相色谱-质谱测定血浆中罗红霉素浓度的 方法 。 方法 色谱柱为 The rmo Hypersil-HyPURITY C18（150×2.1nm, 5μm）；流动相为10mM乙酸铵（1.5％乙酸，0.1％TFA）：甲醇：乙腈（38：365：26）；电喷雾电离源（ESI）；选择性正离子监测（SIM）, 质荷比（m/z）罗红霉素为838、麦迪霉素为815。结果 罗红霉素血药浓度在25～16000ng/ml间线性关系良好，低、中、高三浓度的平均相对回收率分别为98.6%、100.2%和99.4%，日内、间相对RSD均小于15%。结论 本方法简便、快速、准确、灵敏度高，可用于罗红霉素的 治疗 药物监测及药动学 研究 。 【关键词】 罗红霉素；高效液相色谱－质谱法；血药浓度 罗红霉素（roxithromycin）由红霉素衍生而来，抗菌谱与红霉素相同，但抗菌作用比红霉素强，尤其对流感嗜血杆菌、淋病奈瑟杆菌、大肠杆菌、百日咳杆菌的抗菌作用较强，对肺炎衣原体、肺炎支原体、军团菌等细胞内病原微生物的作用也超过红霉素。其特点为对胃酸稳定、口服吸收好、组织穿透性强、血药峰浓度高、分布广且不良反应较少［1］。有关罗红霉素的血液药物浓度测定方法， 文献 报道较多的是微生物法［2～4］，操作繁杂且系统误差大， 影响 结果的准确性；也有人用HPLC-UV法检测［5］，但罗红霉素紫外吸收波长在220nm以下，血浆中的许多内源性物质对其检测有干扰，检测灵敏度不高。本文拟通过实验建立液相色谱-质谱测定血液中罗红霉素浓度的方法，为罗红霉素的治疗药物监测及药动学研究提供简便、准确、高灵敏度的检测方法。 1 材料与方法 1.1 药品与试剂 罗红霉素标准品（购自 中国 药品生物制品检定所），麦迪霉素标准品（购自中国药品生物制品检定所）。乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为 分析 纯。 1.2 仪器 岛津 LCMS2010液相色谱－质谱联用仪，LC-10AD VP低压四元梯度泵，CTO-10A VP柱温箱，SCL-10AD VP系统控制器，LCMSsolution工作站。上海精宏实验设备有限公司DZF-6020型真空干燥器，Heraeus Biofuge stratos 高速冷冻离心机。 1.3 色谱和质谱条件 色谱柱为Thermo Hypersil-HyPURITY C18（150×2.1nm, 5μm）；流动相为10mM乙酸铵（1.5％乙酸，0.1％TFA）：甲醇：乙腈（38：365：26）；流速0.25ml/min；柱温45。电喷雾电离源（ESI），选择性正离子监测（SIM）, 质荷比（m/z）为838(罗红霉素， M+H)，815（麦迪霉素，M+2H）带正电荷的分子离子峰，电离源电压4.5kV，喷雾气氮气的流速为1.5L/min，干燥气体氮气流速为10L/min。脱溶剂温度为250， 检测器电压1.5kV。 1.4 血浆样品处理 吸取0.1ml血浆，置2ml离心管中，加入内标液50μl，0.1ml饱和碳酸钠溶液，漩涡混匀，加提取液（正己烷：二氯甲烷：异丙醇＝20：10：1）1ml，漩涡振荡提取3min，14000r/min离心5min。吸取上层有机相于真空干燥器中抽干，残渣用流动相0.1ml溶解，离心，取上清液5μl进样。记录色谱图，内标法以峰面积定量。 2 实验结果 2.1 质谱和色谱图 图1中A、B分别为罗红霉素和麦迪霉素的质谱扫描图谱；图2中A、B、C分别空白血样、空白血样中加入标准品、受试者服药后6h血浆的总离子流图，麦迪霉素的保留时间约为 2.5min，罗红霉素的保留时间约为 3.0min。血浆内源性物质及其他杂质不干扰样品的分离测定。 2.2 线性范围及最小定量浓度 用空白血浆将罗红霉素标准储备液稀释成不同浓度（25、50、125、250、500、1000、2000、4000、8000、16000ng/ml）的标准血样，按“5.2”项下样品处理 方法 处理。以样品峰面积与内标峰面积之比（Y）对药物浓度（C）进行回归处理，回归方程为Y = 0.0.0009 * Conc.( ng/ml) + 0.017，R2 = 0.9990，线性范围25～16000ng/ml，最小可定量浓度为25ng/ml。 2.3 回收率及精密度 配制浓度50、1000、8000ng/ml的罗红霉素标准血浆各5份，按上法平行操作，进行测定，得日内相对标准差（RSD）均小于15%（分别为8.9%、8.6%和5.7%），平均相对回收率分别为98.6%、100.2%和99.4%。每天配制浓度50、1000、8000ng/ml 的罗红霉素标准血浆各5份，连续测定3天，得日间相对标准差（RSD）均小于15%（分别