HPLC法分析贯叶连翘不同部位中金丝桃素的含量_0.docVIP

HPLC法分析贯叶连翘不同部位中金丝桃素的含量 摘要用HPLC法测定贯叶连翘根、茎、叶、花、果中金丝桃素的含量；结果表明花中含量最高，茎中含量甚微。 关键词：贯叶连翘；金丝桃素；不同部位；HPLC 　　贯叶连翘Hypericum perforatum L.为藤黄科金丝桃属植物，药理实验证明其主要成分金丝桃素具有抗病毒、抗炎及抗肿瘤作用，对人体激活白细胞的免疫功能有抑制作用〔1〕。 目前 以金丝桃素含量为贯叶连翘定量指标。我们建立了HPLC法，并测定了几个产区的贯叶连翘原植物根、茎、叶、花、果中金丝桃素的含量，以指导药材的采收和金丝桃素生产原料的质量控制。 1　仪器与试药 1.1　仪器　HPLC仪(美国Perkin-Elmer公司)；LC-295型紫外可见检测器；Series 200泵；Plus-1022色谱工作站。 1.2　试药　乙腈(色谱纯)；金丝桃素对照品(Sigma公司，批；贯叶连翘(Hypericum.Perforatum Linn)全草(7月下旬至9月上旬采集)。 2　 方法 与结果 2.1　色谱条件　色谱柱：Nova-Pak ODS(4.6mm×200mm)；流动相：甲醇乙腈0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(400100∶100)；流速：1ml/min；检测波长：588nm；Range：0.05AUFS；进样量：10μl，金丝桃素保留时间11min。 2.2　供试液的制备　将原药材各部位样品分别粉碎，使全部过60目筛。精密称取约1g，用甲醇-吡啶(9010)20ml超声提取1h，放冷至室温，最后定容于25ml量瓶中，用0.45μm滤膜滤过，滤液即为供试液。精密称取金丝桃素对照品，用吡啶-甲醇(19)溶解并稀释为0.01mg/ml的溶液，作为对照品溶液。 2.3　提取溶媒的选择　金丝桃素为多酚羟基双蒽酮类，在甲醇中加入一定吡啶使提取溶剂呈弱碱性，有利于金丝桃素的溶出。 2.4　提取时间　对同一药材样品分别加入吡啶-甲醇溶液20ml超声提取15，30，45，60，90min后测定，表明45min以后金丝桃素的含量测定结果趋于稳定(15%)，考虑超声时间过长溶剂升温，故采取超声1h为宜。 2.5　标准曲线的制备　分别吸取0，2.5，5，10，15，20μl的金丝桃素对照品溶液进样，以峰面积对进样量回归得方程：y＝38707x－8804，r＝0.9991。 　　同法取供试品溶液测定。结果见表1。取同一药材测定9次，RSD＝3.30%。 表1　不同产地贯叶连翘各部位的含量 产　地 花 叶 茎 根 果实 全草 甘肃文县 0.072 0.046 0.002 未检出 0.028 甘肃康县 0.090 0.035 未检出 未检出 0.039 湖南龙山 0.058 0.037 0.007 未检出 0.019 0.019 贵州毕节 0.057 0.036 0.003 未检出 0.009 0.022 陕西丹凤 0.086 0.033 未检出 未检出 0.018 湖北恩施 0.085 0.040 未检出 未检出 0.015 四川达川 0.050 0.035 未检出 未检出 0.018 2.6　加样回收试验　精密称取药材粉末3份，分别加入不同量的金丝桃素对照品，按样品测定 方法 操作，金丝桃素平均回收率为100.3%，RSD＝4.17%。 3　讨论 　　金丝桃素含量测定可用薄层扫描法〔2〕或HPLC法，荧光检测并配合梯度洗脱〔3〕。本文建立的HPLC法使用紫外检测器，且为等度洗脱，较上述方法简便、实用，具有较强的可操作性。 　　从含量测定结果可知：金丝桃素在花中含量最高，叶次之，果实含量低，茎中含量甚微，根中未检出金丝桃素。故应在花期采收地上部分，弃去茎干；药材质量以花叶多者为优。 参考 文献 〔1〕　Ezio Bombardelli, Paolo Morazzoni. Hypericum perforatum. Fitoterapia, 1995(1):43 〔2〕　Kartnig Th and Gbel I. Determination of hypericin and pseudohypericin by thin layer chromatography-den-sitometry. J Chromotogr, 1992(609):423 〔3〕　Giuseppe Micali, Francesco Lanuzza, Paolina Curro. High performance liquid chromatographic determination of the biologically active principle hypericin in phytotherapeatic