常用储存液配制.pdfVIP

一.常用贮液与溶液 1mol/L 亚精胺（Spermidine ）: 溶解2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L 精胺（Spermine ）：溶解3.48g 精胺于足量的水中，使终体积为10ml。 分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate ）：将77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定 容至1L 后，用0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml 牛血清蛋白(BSA）：加100mg 的牛血清蛋白（组分V 或分子生物学试 剂级，无DNA 酶）于9.5ml 水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清 蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于 -20℃。 1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g 的原装瓶中加32.4ml 水，分成 小份贮存于-20℃。或转移100mg 的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml 的水配制成1mol/L 二硫苏糖醇溶液。 8mol/L 乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水 定容到100ml。 1mol/L 氯化钾（KCl）：溶解7.46g 氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L 乙酸钠（sodium acetate ）：溶解40.8g 的三水乙酸钠于约90ml 水中， 用冰乙酸调溶液的pH 至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA 和NaOH 溶液（0.5mol/L ），混合后形 成EDTA 的三钠盐。或称取186.1g 的Na2EDTA·2H2O 和20g 的NaOH，并溶于 水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：将23.8gHEPES 溶于约90ml 的水中，用NaOH 调pH （6.8-8.2 ）， 然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml 的浓盐酸至91.4ml 的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg 的IPGT （异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml 水 中，分成小份贮存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O 于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/L PMSF：溶解174mg 的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中， 定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。 20mg/ml 蛋白酶K （proteinase K）：将200mg 的蛋白酶L 加入到9.5ml 水中， 轻轻摇动，直至蛋白酶K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分 装成小份贮存于-20℃。 10mg/mlRnase （无DNase）（DNase－free RNase ）：溶解10mg 的胰蛋白RNA 酶于1ml 的10mmol/L 的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min， 使DNA 酶失活。用1mol/L 的Tris －HCl 调pH 至7.5，于-20℃贮存。（配制过 程中要戴手套） 5mol/L 氯化钠（NaCl）：溶解29.2g 氯化钠于足量的水中，定容至100ml。 10N 氢氧化钠（NaOH）：溶解400g 氢氧化钠颗粒于约0.9L 水的烧杯中（磁力 搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10％SDS （十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS 慢慢转移到约含0.9L 的水的烧杯 中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L 山梨（糖）醇（Sorbitol ）：溶解36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终体 积为100ml。 100％三氯乙酸（TCA ）:在装有500gTCA 的试剂瓶中加入100ml 水，用磁力搅 拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制） 2.5％ X －gal （5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg 的X －gal 于1ml 的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。 100× Denhardt 试剂（Denhardts regent） 成分及终浓度 配制100ml 溶液各成分的用量 2%聚蔗糖（Ficoll，400 型） 2g 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40 ） 2g 2%BSA （组分V ） 2g