果胶裂解酶基因克隆与原核表达.pdfVIP

食品科技 生物工程 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2010 年第35 卷第9 期 果胶裂解酶基因的克隆与 原核表达 1,2 2* 1 3 1 2 2 宋立立 ， 顿宝庆 ， 奚亚军 ， 彭源德 ， 白 娜 ， 路 明 ， 李桂英 (1.西北农林科技大学农学院，杨凌712100 ；2. 中国农业科学院生物质能源研究中心， 北京 100081；3. 中国农业科学院麻类研究所，长沙410205) 摘要： 利用PCR 技术从枯草芽孢杆菌T66(Bacillus subtilis)基因组DNA 中扩增得到果胶裂解酶编 码基因pl(GU644446) ，并构建基因表达载体pPAL7-pl 重组质粒，转化受体菌E.coli BL21 进行原 核表达分析。诱导表达条件为温度37 ℃、时间4 h 、IPTG 浓度0.8 mol/L ，经SDS分析表 明果胶裂解酶编码基因pl 表达的重组酶蛋白相对分子质量为45 ku 。对该基因重组酶粗酶液的酶 学性质进行了初步分析，表明该酶最适反应温度为50 ℃ 、最适反应pH8 ，添加5.5 mmol/L 的 Ca2+ 的条件下，测得果胶裂解酶的最高比酶活为30 U/mL。含有果胶裂解酶编码基因pl 的重组质 粒遗传稳定。 关键词： 果胶裂解酶；基因克隆；原核表达；酶学特性 中图分类号： TS 201.2 文献标志码： A 文章编号： 1005-9989(2010)09-0002-06 Cloning of gene encoding pectin lyase and expression in prokaryotic 1,2 2* 1 3 1 2 2 SONG Li-li , DUN Bao-qing , XI Ya-jun , PENG Yuan-de , BAI Na , LU Ming , LI Gui-ying (1.College of Agronomy of Northwest A F University, Yangling 712100; 2.Biomass Energy Research Center, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081; 3. Institute of Bast Fiber Crops, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Changsha 410205) Abstract: With genomic DNA of Bacillus subtilis as a template, pectin lyase coding gene pl was obtained by PCR amplification. The vector pPAL7-pl was constructed and transformed into the recipient bacterium E. coli BL21. It was expressed under at 37 ℃ , induction with 0.8 mol/L IPTG for 4 h. SDSanalysis revealed that recombinant strain harboring the plas