肿瘤抑制因子WT1对人的诱导型一氧化氮合成酶基因的转录调节作用.pdf

维普资讯 V01．28 高等 学校 化 学 学报 No．10 2007年 l0月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 1907～1910 肿瘤抑制因子 WT1对人的诱导型一氧化氮 合成酶基 因的转录调节作用 宋德贵 ，邹 芳 ，邬开朗 ，刘 燕 ，朱 应 ，吴建国1,2 (1．广西师范大学生命科学学院，桂林 541004；2．武汉大学生命科学学院，武汉 430072) 摘要 将人的诱导型一氧化氮合成酶(hiNOS)启动子构建在带荧光素酶基因的载体pGL3一basic上，构建成 用荧光素酶为系统的启动子，以研究载体p8．3iNOS．结果显示，肾母细胞肿瘤抑制因子(wT】)能够有效地 抑制hiNOS启动子的转录；且wTl的4个选择性剪接本的抑制效果有所不同，其中wTl(一／一)在两种肝 癌细胞 (HepG2和Hep3B)中对hiNOS的表达均具有最强的抑制作用，并且抑制效果具有剂量依赖性，用 Westernblot检测结果进一步证实HepG2细胞 中WT1(～／一)过量表达能下调 hiNOS表达．以上结果说明 WT1在肝癌细胞中对人的hiNOS具有转录调节作用． 关键词 。肾母细胞肿瘤抑制因子(WT1)；人的诱导型一氧化氮合成酶；选择性剪接本 ；转录调节 中图分类号 Q71 文献标识码 A 文章编号 0251-0790(2007)10—1907-04 肾母细胞肿瘤抑制因子(WT1)基因是一个在正常肝组织胚胎期和成熟期非正常肝组织中表达 ，而 在成熟期正常肝组织中不表达的转录因子 ¨J，实验结果证实其表达与肝硬化等肝功能损伤疾病密切相 关 ．wT1基因位于 11号染色体短臂 1区3带，长约50kh，有 10个外显子，转录产物长约3．5 kb ．WT1蛋 白质 由两个功能域组成，羧基末端是4个Cys2一His2锌指结构，由第 7～10个外显子编 码；为DNA结合功能区．氨基端则有一个富含谷氨酸／脯氨酸的区域，是转录调节功能区 ．WT1基 因有两个选择性剪接点，产生4个大小略为不同的mRNA产物 ．第一种选择性剪接在锌指区和谷／ 脯氨基酸富含区之间插入一段 由第 5号外显子的 ． 51个核苷酸编码产生的17个氨基酸的片段；第二 一 种剪接是在第3和第4个锌 结构间 由第9 [ 【二二二】[1】阻口_[]WT1(+t+) 外显子的9个核苷酸编码 的由赖氨酸一苏氨酸一丝氨 Proline—richdomain Exon5 K—T 酸(KTS)组成的氨基酸片段 ．将WT1的4个选 [ [二二二—口_]【【皿 、ⅣTl(+／) 择性 接本 称为w¨：‘ WT1( ， 、 。+’／二： [】[=二二二二]ll[】I口口|[]WT，+) 一 ／+)和 WT1(一／一)(图1)．两种剪接形 。 式使WT1在连接DNA的特性方面及调控基因转录 [ 【二二二二II皿 WTI(十 方面的作用不同 ．其中WTI+KTS(KTS插入)和 Fig．1Fourarernativesplicesomes0fWT1 WT1一KTS(KTS未插入)在细胞核中占据的位置不同．一KTS有较广泛的DNA靶位点，与DNA的亲 和力较强，主要与DNA结合；而 +KTS的靶位点少，与DNA的亲和力弱，主要参与转录．这4种差异 转录本均存在于肝癌组织中． 人的诱导型一氧化氮合成酶(hiNOS)能在炎症或病理情况下，由内毒素和细胞因子等诱导催化形 成一氧化氮(NO)一j，从而参与生物体 内多种生理和病理功能的调节．实验结果证实在病变的肝组织 中，hiNOS基因表达水平明显上调，从而导致肝细胞持续产生过量的NO ．高浓度的N