气相色谱-质谱联用和光谱相关色谱法用于清肝注射液及茵陈药材中挥发性成分的相关分析.docVIP

气相色谱-质谱联用和光谱相关色谱法用于清肝注射液及茵陈药材中挥发性成分的相关分析 作者：高海燕 郭方遒 易伦朝 梁逸曾 【摘要】 目的对清肝注射液和茵陈药材中的挥发性成分进行定性、定量测定，并分析注射液和药材之间的相关性。 方法采用气相色谱-质谱（GCMS）法测定清肝注射液及茵陈药材中的挥发性成分并用光谱相关色谱法对它们之间的相关性进行分析。挥发性成分采用水蒸气蒸馏法提取。结果清肝注射液中分离出的23个主要物质，有21个来源于茵陈药材。茵陈药材中分离28个物质，定性25个。 结论GCMS法与光谱相关色谱法结合可对具有挥发性成分的中药注射液及其对应药材的相关性进行快速比较分析。 【关键词】 清肝注射液 茵陈 气相色谱 质谱联用 光谱相关色谱 清肝注射液具有清热利湿、利胆退黄之功效［1］，在临床上已得到广泛应用，其挥发性成分主要来自茵陈药材。茵陈（Herba Artemisiae Scopariae）为传统中药［2］，临床上被广泛用于 治疗 黄疸、肝炎等疾病，其挥发油具有广谱抗菌和杀菌作用［3］。在中药制剂的质量控制中，注射液中有效成分的来源，即其与对应药材的相关性十分重要。中药及其注射液的成分非常复杂，即使用正交投影法(OPA)［4］，子窗口因子分析法(SFA)［5］，直观推导式演进特征投影法(HELP)［6，7］等二维数据分辨方法进行解析后与标准谱库进行匹配，也不能将所有物质定性。在组分不完全清楚的情况下，本实验充分利用联用色谱的色谱、质谱信息，结合光谱相关色谱法［8］，对相同条件下所得的清肝注射液和茵陈药材挥发性成分的数据进行了详细的对比。报道如下。 1 仪器与试药 GC-2010A型气相色谱仪，GCMS-QP2010型气相色谱质谱联用仪（日本岛津公司）；挥发油提取器。 清肝注射液（批号：040607）和茵陈药材均由江西省天施康中药股份有限公司提供；正己烷为分析纯，水为蒸馏水。 2 方法 2.1 方法原理相同条件下所得的两个色谱曲线，虽然同一流出组分的保留时间可能存在漂移，但其光谱（或质谱）应该相同或相似。因此，通过对不同流出时间点的光谱（或质谱）进行相关 计算 ，可得一个类似色谱的光谱相关系数曲线，称之为光谱相关色谱［8］。 一般说来，两个组分的光谱相关系数可由下式计算： r(i,j)=(si-i)T(sj-j)ll(sj-j)ll(sj-j)ll (1) 式中- 1 ≤ ≤1 ， r越大表示组分i的光谱（或质谱）si 与组分j 的光谱（或质谱）Sj 越相似。当r = 1 且保留时间相近时，色谱曲线中的两个组分应为同一化学物质。实际上，由于噪声和量测误差等因素的存在， r 最大值不可能等于1，只能接近于1。‖·‖表示Frobenius 范数， T为向量的转置，变量上的一横表示相应变量的均值。 设某一样本化学色谱指纹图谱的某一组分纯物质质谱为s,另一样本色谱指纹图谱所包含的所有质谱,即每一保留时间点所对应的质谱，记为xj ( j = 1 , . . . , m , m 为最大色谱保留时间点) ，计算s与xj 的相关系数即可得相对于该纯物质的光谱相关色谱，根据式(1) 计算如下： r(s,xj)=(s-)T(xj-j)ll(s-)ll ll(xj-j)ll (2) 将r ( s , Xj) 对色谱保留时间作图即得到该目标物质与这一样本色谱指纹图谱的光谱相关色谱曲线。如果色谱流出时间方向上所对应的一段光谱相关色谱曲线的值很接近1，则说明目标物质存在于该样本，再结合色谱保留时间信息即可实现相同条件下样本的相关性分析。 2.2 供试品溶液的制备量取注射液50 ml（或称取药材12.5 g），置于圆底烧瓶中，加玻璃珠数粒，连接挥发油提取器。挥发油提取器的收集管中上端加水，使充满刻度部分，再加正己烷1 ml，连接回流冷凝管，适当温控提取。从回流开始计时，控制温度使每分钟约20滴。60 min后停止加热，冷却，收集含有挥发油组分的正己烷溶液。用正己烷定容至2 ml，即得。所用药材的量与注射液的浓度一致。 2.3 色谱条件 2.3.1 GC条件OV-1弹性石英毛细管柱30 m×0.25 mm×0.25 μm，进样口温度250，载气为N2，流速0.70 ml·min-1，分流比51，程序升温起始温度为60 (保持5 min)，然后以4·min-1的速度升温至240 （保持5 min），进样量1μl。 2.3.2 MS条件电离方式为Ei源； 电子 能量0.75 kv；离子源温度200；质量范围（m/z）30～400 amu；扫描间隔0.2 s/scan。 3 结果 3.1 茵陈药材与注射液中挥发性成分定性、定量分析采用GC/MS联用技术，对茵陈药材和清肝注射液中的挥发性成分进行分析，分