气库上方土壤中甲烷氧化菌群落研究-以大港油田板873储气库为例.pdfVIP

学兔兔学兔兔 石油天然气学报 (江汉石油学院学报) 2010年 6月 气库上方土壤中甲烷氧化菌群落研究 — — 以大港油田板873储气库为例 张 凡 (中国地质大学(北京)能源学院，北京1 00083) 余跃惠，舒福昌，孔淑琼，周玲革 (长江大学化学与工程学院，湖北~U Oqxl 434023) 候读杰 (中国地质大学(北京)能源学院，北京1 ooo83) [摘要]利用基于甲烷氧化菌 (MOB)功能基因pmoA克隆建库以及变形梯度凝胶电泳 (DGGE)分子生 态学方法来研究已知的大港油田天然气库上方土壤样品甲烷氧化菌群落多样性。构建了同一取样点不同 深度土壤样品5个甲烷氧化菌功能基因pmoA基因克隆建库，所有的克隆都属于甲烷氧化菌。克隆文库 结果显示同一剖面不同深度土壤中MOB的优势菌群有所不同：优势菌甲基弯曲菌属 (Methylosinus)出 现在所有的5个克隆文库中。甲基孢囊菌属 (Methylocystis)在文库中所占得比例从 11 (DG0．5)上升 到30 (DG1)，在文库DG1．5达到31 ，接着下降4 (DG2)，在文库DG2．5没有发现甲基孢囊菌属 (Methylocystis)。DGGE电泳图也同样显示出以上的甲烷氧化菌菌群的变化。 [关键词]甲烷氧化菌pmoA基因；甲烷氧化菌群落；克隆文库；变性梯度凝胶电泳 (DGGE) [中图分类号]TE822 [文献标识码]A [文章编号]1000—9752(2010)03—0364—05 在油气藏压力的驱动下其轻烃气体持续的向地表作垂直的扩散和运移，土壤中的专性微生物以轻烃 作为唯一的能源，在油气藏正上方的土壤中非正常发育并形成微生物异常_1]。微生物油气勘探 (MPOG，Microbial Prospect of Oil and Gas)技术通过检测这种异常进而预测下伏油气藏的存在。甲烷 氧化菌是以甲烷作为唯一碳源和能源的细菌，常被用来作为MPOG的指示菌_2。]。 传统的MPOG技术是利用微生物计数、富集培养、分离以及微生物代谢产物的生理、生化分析来研 究土壤中甲烷氧化菌的异常，从而预测油气藏的存在[4 ]。但是，研究表明，可培养微生物仅占自然界微 生物的0．1 ～15 左右 ，而且能培养的甲烷氧化菌有130多种，传统培养方法得到的甲烷氧化菌为混 合菌，不能确定其种属，因此仅通过研究可培养的甲烷氧化菌异常来预测下伏油气藏的存在是不全面的、 不精确的。分子生态学方法就是在未培养基础上通过系统发育以及功能基因探针的方法来直接分析土壤样 品中的甲烷氧化菌 ]。甲烷氧化菌的功能基因常被用来检测甲烷氧化菌的存在和数量 ]。甲烷氧化菌的功 能基因包括：pmoA、mmoX和mxaF，这些功能基因分别编码颗粒状甲烷单加氧酶基因、可溶性甲烷单加 氧酶基因以及甲醇脱氢酶基因口 。在这些功能基因中pmoA基因存在于除methylocella以外的所有已知的 甲烷氧化菌中。因此pmoA基因被广泛的运用于环境样品中甲烷氧化菌的检测与定量_1 。 通过分子生态学的方法如克隆建库和梯度凝胶电泳 (DGGE)方法，研究了已知气库上方的土壤样 品中的pmoA基因，对样品中的甲烷氧化菌进行群落分析，从而确定不同深度土壤中优势菌群变化和 天然气微渗漏特异性指示菌。 l 材料和方法 1．1 取样 样品取自中石油大港油田 (天津)板876储气库上方土壤中。取样点距注气点板876井为 100m。 [收稿日期]2o1o—o2一lo [基金项目]中国石油天然气集团公司创新基金项目 (07E1025)。 [作者简介]张凡 (1980一)，女，2002年江汉石油学院毕业，博士生，现主要从事石油微生