响应面法优化大孔树脂纯化昆仑雪菊色素的工艺.docVIP

响应面法优化大孔树脂纯化昆仑雪菊色素的工艺 　　[摘要]采用大孔树脂法纯化昆仑雪菊色素，应用响应面法（RSM）建立二次回归模型，优化昆仑雪菊色素纯化工艺。实验表明XDA-7树脂对昆仑雪菊色素的综合纯化效果最佳。昆仑雪菊色素吸附的最佳工艺为色素溶液浓度2.7gL-1，流速6mLmin-1，pH6，在此条件下的色素吸附率可达94.16%；最佳解吸条件为乙醇浓度64%，流速5mLmin-1，洗脱用量4Bv，该条件下色素解吸率可达98.72% [关键词]昆仑雪菊；色素；大孔树脂；响应面法；纯化 昆仑雪菊为菊科金鸡菊属植物两色金鸡菊Cor-eopsis tinctoria Nutt.的干燥头状花序，又名“血菊”。原产美国中西部地区，目前我国新疆部分地区作为茶用和保健菊进行大面积栽培。《本草汇言》称其可“破血疏肝，解疔散毒”，现代研究表明其在降低血压、血脂，抗衰老、提高机体免疫力，抗肿瘤，抗糖尿病方面都有显著疗效，具有极高的药用价值。大孔吸附树脂为一种选择性有机高聚吸附剂，具有吸附快、易洗脱、吸附容量大、可再生、使用寿命长等优点，近年来广泛用于天然产物的提取分离工作中。响应面法（response surface methodology，RSM）是采用多元二次回归方程拟合各因素与响应值之间的函数关系，对回归方程的分析而寻找最佳工艺参数，从而解决多变量问题的一种统计方法。近年来，国内外对雪菊的研究很广泛，主要有化学成分和药理作用两方面。昆仑雪菊主要含有黄酮、多糖、皂苷、氨基酸、挥发油等成分，还有蛋白质、生物碱、有机酸、酚类等成分。药理作用主要有降血脂、降血压、抗衰老、抗癌、抗炎、抗病毒等功能，对昆仑雪菊色素的研究较少，本文旨在为其色素的纯化工艺开展研究 1 材料 昆仑雪菊于2012年10月采自新疆昌吉，原植物经南京农业大学郭巧生教授鉴定为菊科金鸡菊属植物两色金鸡菊C.tinctoria 书时脂HPD100，AB-8，D101，S-8，DM301，XDA-8，XDA-7（安徽三星树脂科技有限公司）；乙醇（分析纯），盐酸和氢氧化钠（均为南京化学试剂有限公司）；乙腈色谱纯（江苏汉邦科技有限公司） Agilnt 1120 Compact LC（G4288A）（美国Agi-lent Technologies公司）液相色谱仪；KH5200B型超声波清洗器（昆山禾创声仪器有限公司）；旋转蒸发器RE-20009（上海亚荣生化仪器厂）；LGJ-12冷冻干燥机（北京松源华兴科技发展有限公司）；紫外分光光度计Moha-1506（上海谱元仪器有限公司） 2 方法 2.1 色素提取工艺流程 称取200g干燥昆仑雪菊，粉碎，过60目筛，加入75%乙醇2L，超声提取2次，抽滤合并滤液，旋转蒸发浓缩，浓缩液冷冻干燥后得红褐色粉末，即雪菊色素 2.2 色素测定波长选择 将获得的雪菊色素粗粉末配制成1gL-1的色素母液，紫外-可见分光光度计200～800nm扫描，确定其最大吸收波长 2.3 大孔树脂预处理 用蒸馏水充分淋洗浸泡待用的树脂，除去杂质，75%乙醇浸泡12h后，蒸馏水洗去残留的乙醇，并活化树脂。再分别用40mgL-1NaOH溶液和4%盐酸溶液浸泡4～6h，除去杂质，用蒸馏水反复冲洗至中性。大孔树脂理化性质见表1 2.4 色素静态吸附 分别称取2.00g已活化的不同型号大孔树脂置于50mL锥形瓶中，加入10mL色素母液，并在380nm波长测定母液吸光度A0，室温静态吸附24h，380nm波长处测定上清液吸光度A1，比较不同型号树脂对色素吸附率 静态吸附率=[（A0-A1）/A0]×100% 2.5 色素静态解吸 在已吸附色素的不同型号大孔树脂中加入75%乙醇10mL，室温静态解吸24h，380nm波长处测定上清液的吸光度A2，比较各型号树脂对色素解吸率 静态解吸率=[（A2-A1）/1]×100% 对静态吸附及解吸后的上清液进行HPLC分析。色谱条件为Agilent TC-C1。色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱（0～11min，10%。18%A；11～30min，18%～20%A；30～40min，20%A）；流速1mLmin-1；检测波长380nm；柱温30℃；进样量5μL 2.6 吸附条件下的响应面 用已活化的XDA-7型大孔树脂材料制备色谱柱，进行色素的吸附实验，在单因素的基础上，以样品溶液浓度、样品溶液DH、流速为考察因素，以收集到的滤液的吸光度为考察指标，通过Design-Expert7.0软件，根据Box-Behnken中心试验方案对影响因素进行优化，建立回归模型，确定最佳吸附条件，经过前期的单因素实验，设计各因素水平见