非人灵长类动物AAV病毒使用报告.pdfVIP

非人灵长类动物AAV 病毒使用报告 来自和元上海 呼之欲出的“中国脑计划”，预料之中的“猴子王国” “我们无法容忍对自己的脑如此一无所知” 本世纪初，美国、欧盟、日本开展了声势浩大、各具特色 的“脑计划”。在此浪潮下，中国怎能缺席？经过数年的讨论， 中国特色的“脑计划”也即将开始实施。中国“脑计划”可以用“一 体两翼”来概括 （1），即以理解脑的基本认知功能为主体（认识脑），开发重大脑疾病的早期诊断 和治疗技术（保护脑），开发人工智能（模拟脑）。而非人灵长类动物（NHP）的研究将是中国脑 科学研究的特色和优势！ 和元上海作为业内极具口碑的集基础研究、基因治疗药物研发和临床级病毒载体产业化于一体的高科 技企业，不断学习、积极研发新产品，用实际行动助力中国脑研究。本文将重点介绍病毒载体（特别是 AAV）在NHP 脑研究中的应用，以及来自北京大学、中国科学院昆明动物所的和元合作者使用AAV 感染 猕猴大脑皮层的效果报告。 我们为什么要用NHP 动物进行研究？ 由于和人类在进化上是近亲，NHP动物的大 脑组织和结构与人脑非常相似，而且也只有NHP 才具有一些与人类相似的高级脑认知功能，如自 我意识、语音功能等，因此对这样的脑高级认知 功能及相关脑疾病的研究，最优选择就是非人灵 长类动物。除此之外，NHP的体内环境与人最为 接近，所以不止脑研究，所有的生理、病理、药 理研究都离不开NHP的应用。中国学者在这个领 域已经走到世界的前列，2016年，Nature 杂志以《Monkey Kingdom》为题专门报道了中国非人 灵长类研究的进展，提出“中国可能是未来全世界NHP研究的中心，所有的药物、治疗方案可能都 需要中国NHP动物研究的验证”(2)。 病毒载体在NHP研究中的应用 使用NHP进行脑研究最大的障碍是时间，传统的转 基因技术研究NHP可能需要数十年来观察动物表型，科 学家等不了，人类也不能无休止地等下去。怎么办？这 种情况下，病毒载体的特点具有独一无二的先天优势！ 利用病毒载体，我们可以携带目的基因到达成年NHP动物的脑中，结合光遗传学、化学遗传 学操控特定神经元的活动；还可以携带钙敏感通道，结合钙成像技术实时观察猴脑神经元的活动 情况(3) ；更为重要的是，我们还能够在成年NHP脑或组织进行基因操作，通过结合类似于RNAi、 CRISPR-Cas9的基因操作手段、观察行为变化，寻找药物靶点 ！ 那么，我们用什么病毒？在脑研究中常用的病毒里，由于HSV、RV、PRV等病毒毒性大且NHP 的感染效果不好，而慢病毒体内应用的扩散效果差，所以AAV是首选 ！而AAV有多种亲和力不同 的血清型，目前的报道中，使用各种血清型的脑研究均有报道，且说法莫衷一是，具体如何选择 需要根据具体需求选择（关于特定脑区使用何种AAV的建议可直接回复本邮件）。接下来，我们 将向您介绍两位合作研究者的使用报告 ： 第一组结果来自中国科学院昆明动物所胡新天教授2017年的最新论文(4) ： 在这篇文章中，作者在猕猴大脑皮层定位注射和元构建的AAV2/9病毒或AAV2/2病毒 （5ul）， 携带绿色荧光蛋白。表达6周后，可以明显观察到大量的皮层神经元被成功标记 （图1）。同时， 作者还比较了不同血清型AAV感染猕猴大脑皮层神经元的效果 （图2），能够明显看到和元构建的 AAV2/9和AAV2/2均能够高效感染猕猴大脑皮层神经元。 图1 两种血清型AAV病毒均能高效感染猕猴大脑皮层神经元 图2 不同AAV对猕猴脑区神经元感染的效率比较 第二组