第一章、氨基酸的结构及性质.pptVIP

高级生物化学及实验;主要内容;第一章、氨基酸的结构及性质 —— 组成蛋白质的基本单位;第一节 氨基酸的分类;一、氨基酸的结构通式; ;（一）按R基的化学结构分类 可分为三类：脂肪族、芳香族和杂环族 1、脂肪族氨基酸 ● 含一氨基一羧基的中性氨基酸;丝氨酸 (Ser, S);● ● ● 酸性氨基酸(一氨基二羧基)及其酰胺;● ● ● ● 碱性氨基酸(二氨基一羧基);2、芳香族氨基酸;3、杂环氨基酸;说明：关于杂环氨基酸和杂环亚氨基酸;非极性氨基酸 极性中性氨基酸 酸性氨基酸 碱性氨基酸;1. 酸性氨基酸;甘氨酸 glycine Gly G 5.97;色氨酸 tryptophan Trp W 5.89;3个有个性的氨基酸 ;3）半胱氨酸(Cys) 它的个性不仅表现在其侧链有一定的大小和具有高度的化学反应活性，还在于两个 Cys 能形成稳定的带有二硫（桥）键的胱氨酸。二硫键不仅可以在肽链内，也可以在肽链间存在。更有甚者，同样的一对二硫键能具有不同的空间取向。 ; 半胱氨酸 ; ;（三）不常见的蛋白质氨基酸;N-甲基赖氨酸存在于肌球蛋白中。;（四）非蛋白质氨基酸; β -丙氨酸是遍多酸(泛酸,一种维生素)的前体成分 γ –氨基丁酸是传递神经冲动的化学介质 ;L-鸟氨酸、 L-瓜氨酸是尿素循环的中间体;第二节 氨基酸的重要理化性质和功能; 1、溶解性 氨基酸在水中的溶解度差别很大, 除胱氨酸、半胱氨酸和酪氨酸外, 一般都能溶于水, 并能溶解于稀酸或稀碱中, 但不能溶解于有机溶剂 ( 通常酒精能把氨基酸从其溶液中沉淀析出 )。 脯氨酸和羟脯氨酸能溶于乙醇或乙醚中, 且二者极易溶于水而潮解。;2. 氨基酸的旋光性; 氨基酸的构型－都有 D-型和 L-型 2 种立体异构体;L-丙氨酸; 蛋白质中发现的氨基酸都是L-型的（故习惯上书写氨基酸都不注明构型和旋光方向）。;3、紫外吸收 ; Phe：?max = 257nm，?257 = 2.0×102 mol-1?L?cm-1 Tyr：?max = 275nm，?275 = 1.4×103 mol-1?L?cm-1 Trp：?max = 280nm，?280 = 5.6×103 mol-1?L?cm-1 ;分光光度计定量分析依据;1、两性解离和等电点;pH = pI 净电荷=0;A. 等电点时，氨基酸的溶解度最小，易沉淀。 利用该性质可分离制备某些氨基酸。例如谷氨酸的生产，即将微生物发酵液的pH值调至3.22（谷氨酸的等电点）而使谷氨酸沉淀析出。 B. 利用各种氨基酸的等电点不同，可通过电泳法、离子交换法等在实验室或工业生产上进行混合氨基酸的分离或制备。 氨基酸的等电点可由其分子上解离基团的解离常数来确定。 ;（3）氨基酸等电点的计算;一氨基一羧基AA的等电点计算，以丙氨酸为例:;一氨基二羧基氨基酸等电点的计算, 以Asp为例:;二氨基一羧氨基酸的等电点的计算, 以Lys为例：;2. 氨基酸参与的化学反应;反应要点 A.该反应由NH2与COOH共同参与 B.茚三酮是强氧化剂 C.该反应非常灵敏，可在570nm测定吸光值 D. 测定范围：0.5~50μg/ml E.脯氨酸与茚三酮直接生成黄色物质（不释放NH3） 应用： A.氨基酸定量分析（先用层析法分离） B.氨基酸自动分析仪： 用阳离子交换树脂，将样品中的氨基酸分离，自动定性定量，记录结果。;（2） 与甲醛反应;(3) 与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应;★首先由Sanger应用，确定了胰岛素的一级结构 A.肽分子与DNFB反应，得DNP-肽 B.水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨基酸 C.分离DNP-氨基酸 D.层析法定性DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的种类、数目 ;(4)与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应;Edman （苯异硫氰酸酯法）氨基酸顺序分析法实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。 肽链（N端氨基酸）与PITC偶联，生成PTC-肽 环化断裂：最靠近PTC基的肽键断裂，生成PTC-氨基酸和少一残基的肽链，同时PTC-氨基酸环化生成PTH-氨基酸 分离PTH-氨基酸 层析法鉴定 Edman降解法的改进方法--- DNS-Edman降解法 用DNS(二甲基萘磺酰氯)测定N端氨基酸 原理