槐角染料木素对哮喘小鼠治疗作用与机制.docVIP

槐角染料木素对哮喘小鼠的治疗作用和机制 　　[摘要] 目的 探讨槐角染料木素对哮喘小鼠白介素-5（IL-5）、白介素-13（IL-13）含量的影响。 方法 32只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组（n=10）、模型组（n=11）和干预组（n=11）。模型组和干预组采用卵清蛋白（ovalbumin，OVA）腹腔注射致敏和雾化吸入激发，建立哮喘小鼠模型。干预组于激发前腹腔注射染料木素30 mg/kg。观察小鼠哮喘症状的发生情况，检测小鼠血清OVA特异性IgE水平。检测肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中嗜酸性粒细胞（eosinophil，EOS）计数及其分类比值和细胞因子IL-5、IL-13含量。 结果 与模型组相比，干预组小鼠哮喘症状出现较迟，且症状较轻微。与对照组相比，模型组BALF中EOS计数及分类比值、IL-5和IL-13的含量及血清中OVA特异性IgE水平均明显增加（均P 　　1 材料与方法 1.1 主要仪器 JJ200电子秤，YLS-8A多功能诱咳引喘仪，Sysmex-XT 2000i全血细胞分析仪，Luminex200液相芯片分析系统，美国Bio-TEK ELx 508自动洗板机，美国Model 680伯乐酶标仪 1.2 主要试剂 染料木素（大连美仑生物技术有限公司），卵清清蛋白OVA（Sigma，SLBB4340V），白细胞分类染液（Sysmex，A5005），血红蛋白溶血素（Sysmex，A5005），嗜碱细胞溶血素（Sysmex，R5036），白细胞溶血素（Sysmex，R5019），PK-30L CELLPACK稀释液（Sysmex，G5248），Mouse IL-5 simplex（eBioscience，117633009），Mouse IL-13 simplex（eBioscience，115826007），抗-OVA IgE试剂盒（eBioscience，102715） 1.3 实验动物及饲养 6～8周SPF级BALB/c雌性小鼠32只，购自广东省医学实验动物中心，质量合格证：No.44007200022603。按照广东省动物实验监测所啮齿类接收、适应及检疫操作规程（VET-003）和实验动物饲料、垫料和饮水的质量控制操作规程（LA-ADM006，LA-ADM007，LA-ADM008）操作。动物饲养于屏障动物实验室，实验动物使用许可证编号：SYXK（粤）2012-0122，IACUC审批编号：2015015。每日室温控制为20～26℃，湿度控制为40%～70%。SPF级鼠饲料购自北京科澳协力饲料有限公司，饮用消毒纯水，每日足量供给 1.4 实验方法 1.4.1 动物分组 32只小鼠随机分为对照组（10只）、哮喘模型组（简称“模型组”，11只）及染料木素给药干预组（简称“干预组”，11只） 1.4.2 动物致敏 模型组和干预组分别于第1、15天致敏，每次每只小鼠腹腔注射致敏液0.2 mL（OVA溶液的配制：OVA 10 mg加生理盐水10 mL，氢氧化铝40 mg加生理盐水10 mL，两者等体积混匀，0.22 μm滤器过滤）。对照组于相同时间腹腔注射等量生理盐水 1.4.3 动物激发 模型组和干预组小鼠于实验第22天起，每日雾化吸入5% OVA激发液，每次30 min，连续14 d。干预组并于每次雾化前30 min给予腹腔内注射染料木素30 mg/kg。对照组于相同时间雾化吸入等量生理盐水 1.5 观察指标 1.5.1 哮喘症状观察 观察各组小鼠每次激发后症状及体征变化，如精神状态、呼吸频率、大小便失禁及抽搐等情况。并参照王力宁等[11]的方法，对小鼠哮喘症状进行评分，分值越高表示哮喘症状越重。见表1 1.5.2 血清中Anti-OVA IgE水平检测 小鼠摘眼球取血200 μL，离心后取血清，用ELISA法检测Anti-OVA IgE水平，操作严格按说明书进行 1.5.3 支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞计数及其分类比值分析和IL-5、IL-13含量检测 小鼠处死后，行气管插管，在右主支气管处结扎右肺，用0.3 mL冰PBS分3次灌洗左肺并回收支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF），采用Sysmex-XT2000i全血细胞分析仪分析BALF中嗜酸性粒细胞（eosinophil，EOS）计数及其分类比值，Luminex200检测BALF中IL-5、IL-13的含量 1.6 统计学方法 采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-Q检验