金钱草总黄酮提取液抑制大鼠草酸钙结石形成机制探讨.docVIP

金钱草总黄酮提取液抑制大鼠草酸钙结石形成机制的研究 　　[摘要] 目的 探讨金钱草总黄酮提取液抑制大鼠草酸钙结石形成机制的研究。 方法 常规饲养大鼠1周，采用乙二醇饮水和氯化铵灌胃造模草酸钙结石大鼠模型，将30只SD大鼠随机分为空白对照组（A组）、草酸钙结石模型组（B组）和金钱草总黄酮组（C组）。给药4周后收集各组大鼠24 h尿液，检测尿pH值及24 h尿钙、尿草酸、尿酸、尿葡胺聚糖和尿凝血酶原片段-1的含量。 结果 金钱草总黄酮组大鼠24 h尿量较草酸钙结石模型组增加，差异有统计学意义（P0.05）。金钱草总黄酮组大鼠与草酸钙结石模型组大鼠比较，其24 h尿钙和尿草酸含量均降低，而尿凝血酶原片段-1的含量增加，差异均有统计学意义（P0.05）。 结论 金钱草总黄酮提取液可能通过增加大鼠24 h尿量，降低尿液中成石因子-尿钙和尿草酸的含量，增加尿液中抑石因子-尿凝血酶原片段-1含量，从而抑制草酸钙结石的形成 [关键词] 草酸钙；结石；金钱草总黄酮；凝血酶原片段-1 [中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）18-0030-04 泌尿系结石是泌尿科最常见的疾病[1]，在欧美国家，5%～10%在一生中至少发生一次泌尿系结石，欧洲泌尿系结石年新发病率约100/10万～400/10万人[2]。我国泌尿系结石发病率为1%～5%，年新发病率约150/10万～200/10万人[3]。泌尿系结石的成分有草酸钙、磷酸钙、尿酸、磷酸镁铵、胱氨酸等，其中草酸钙及含草酸钙的结石约占泌尿系结石的80%以上[4] 泌尿系结石的形成受到尿液中许多成分的影响，如尿中钙、草酸等成分促进结石生成，称为成石因子。而尿液中又有许多抑制结石形成的物质，它们在正常人尿液中浓度或活力高，而在结石患者中含量低。这些抑石因子大体可分为小分子抑制物和大分子抑制物，其中小分子抑制物包括枸橼酸盐、镁、焦磷酸盐、α-亚麻酸等[5]，而大分子抑制物包括肾钙素、蛋白多糖、骨桥蛋白、凝血酶原片段、α-胰蛋白酶抑制物片段、核糖核酸、酸性黏多糖、黏液素[6-8]。成石抑制物的研究已成为泌尿系结石的重要研究方向 中医药治疗泌尿系结石有悠久的历史，疗效显著，且副作用少，但中草药抑制结石形成的机制报道甚少，至今尚不清楚，尤其是对其中单味中药的研究更少。金钱草是目前大多数排石方剂中最常见的一味要药[9]，其中黄酮类化合物为其主要成分[10，11]，本次研究旨在观察金钱草总黄酮类化合物对尿液中成石因子和抑石因子等成分的影响，从而探讨金钱草防治草酸钙结石的机制。现报道如下 1材料与方法 1.1实验动物 选用8周龄SD健康雄性大白鼠30只，体重200～250 g[浙江中医药大学动物实验中心提供，许可证编号：SCXK（沪）2008-0016] 1.2金钱草总黄酮提取液的制备 金钱草干燥全草（购于浙江中医药大学附属第二医院中药房）10 kg粉碎后经体积分数为80%乙醇提取，加热回流2次，每次3 h，回收得到约1 kg浸膏，通过溶剂萃取得到石油醚部分与水部分。水部分经大孔树脂柱色谱，以水-乙醇梯度洗脱，得到总黄酮部分约150 g，加入蒸馏水定容至1 mg/L（由浙江中医药大学附属第二医院药剂科制备） 1.3草酸钙结石模型造模 采用1%乙二醇（EG）饮水+2%氯化铵（AC），每天灌胃2 mL/只 1.4实验动物分组及给药方法 随机分为3组，每组10只。空白对照组（A 组）：自来水饮水2 mL/只/d+生理盐水2 mL/只/d灌胃；草酸钙结石模型组（B组）：1%乙二醇（EG）饮水+2%氯化铵（AC）2 mL/只/d+ 生理盐水2 mL/只/d灌胃；金钱草总黄酮组（C组）：1%EG饮水+2%AC 2 mL/只/d+金钱草总黄酮提取液2 mL/只/d灌胃。各组大鼠均标准喂养，饲养5周，第1周先适应环境，从第2周开始给药。饲养环境：温度22℃～25℃，湿度：50%～60% 1.5观察指标 灌胃4周后大鼠单独置入代谢笼中，收集其24 h尿液，标本中加入0.02%叠氮化钠防止细菌分解，统计24 h尿量。检测24 h尿液中钙、草酸、pH值、尿酸、葡胺聚糖、凝血酶原片段-1的含量。尿钙、尿草酸、尿酸由我院生化室全自动生化仪检测。尿葡胺聚糖购买人糖胺聚糖（GAG）ELISA试剂盒（上海拜力生物科技有限公司）进行检测，凝血酶原片段-1购买人凝血酶原片段F1+2（F1+2）ELISA试剂盒（上海顺科生物科技有限公司）检测 1.6统计学处理 采用SPSS19.0统计学软件进行处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多个样本均数比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，PF0.05（2，2