流场压力信号变化对体外培养内皮细胞增殖与凋亡及其相关蛋白的影响.pdf

流场压力信号变化对体外培养内皮细胞增殖和凋亡 及其相关蛋白的影响1 1,2 1 1 2 1 郭应强 ，胡佳 ，张尔永 ，许唯临 ，石应康 1 四川大学华西医院胸心血管外科，成都（610041 ） 2 四川大学高速水力学国家重点实验室，成都（610044 ） E-mail: drguoyq@, drguoyq@ 摘 要：血管流场边壁几何形状的改变势必引起局部流场内压力发生变化，从而导致血管内 皮细胞(Endothelial cells, ECs)流变学特征的变化，并引起ECs增殖、存活能力等一系列病理 生理学改变。本研究在可控压力变化ECs流室系统平台上，对流场内培养的Ecs加载不同的 压力信号，观察其细胞的增殖和凋亡与压力信号变化之间的关系，研究在细胞增殖与凋亡过 程中起着关键作用的效应蛋白分子的变化，探讨流场压力信号对ECs活力的影响及其量-效关 系。通过设置静态培养、单纯剪切力对照组，采用透射电镜、流式细胞术、定量RT-PCR技 术和蛋白印记法，观察了在平板流室内于不同压力加载下培养的ECs超微结构的改变,细胞周 期分布和细胞增殖、凋亡的变化，测定分析了此过程中重要效应分子Caspase-3基因的表达 以及P53 、Bcl-2和Fas蛋白在翻译水平的变化规律。研究结果表明，流场压力降信号(-40cmH2O) 可诱导ECs 出现呈时间依赖性的细胞凋亡现象。P53 、Bcl-2和Fas蛋白的表达在流场压力降低 信号(-40cmH2O)诱导细胞凋亡的发生发展中起着重要的调控作用。 关键词 内皮细胞；流场压力；凋亡；Caspase-3 中图分类号 R331；Q813 1. 引言 近年来，心血管系统边壁损伤与局部流场紊乱之间关系的研究是心血管流体力学研究的热 点之一[1] 。国内外有关这方面的研究集中于流体速度、切应力与血管壁 ECs 和平滑肌细胞 （Vascular Smooth Muscle Cells ，VSMCs ）损伤关系的探索，而对于流场内压力变化与ECs 损伤之间的联系的 探讨不足。在工程流体力学的研究中表明：高速射流流场边壁的逆流（Flow reversal ）和低 压力环境中，由于水流空化（Cavitation ）引起的空蚀作用可导致流场固体边壁出现严重破 坏 [2, 3] 。心血管系统流场与血管壁细胞结构之间也存在类似的流动特性，人体内诸如动脉粥 样硬化等血管内壁的损伤往往发生在血管自然走行过程中几何形状发生剧烈改变的部位，既 往我们的研究发现这些部位流场内速度、切应力和压力的变化幅度远大于血管几何形状变化 平缓的部位[4] 。有学者观察到局部流场内压力的增加可导致Ecs 生物学行为异常，过高的压 力加载会导致 Ecs 损伤的发生[5, 6]，那么流场内过低的压力是否会对 Ecs 的活力产生影响， 这在国内外文献中鲜见报道。本研究建立起改良流动培养的流室压力系统，在稳定的速度、 低切应力水平基础上实现可调控的压力信号来加载 Ecs ，利用流式细胞术、定量 RT-PCR 技 术和蛋白印迹法相结合来检测细胞增殖与凋亡的变化及其中起着关键作用的效应蛋白分子， 从而观察流场压力信号变化（压力降低或升高）是否会损伤 ECs 并研究分析其量—效关系 变化，以便深入了解不同压力信号对细胞增殖和凋亡的影响程度，有助于对血管壁细胞损伤 的流体力学机制的全面阐述并为临床治疗提供有力的理论基础。 1本课题得到国家自然科学基金资助项目30670515），教育部博士点基金（新教师）资助项目 （20070610158）的资助。 - 1 - 2. 材料与方法 2. 1 脐静脉Ecs株EA.Hy926细胞的培养和鉴定 将EA.Hy926细胞株培养于RPMI1640全培养基，37℃、5 ％CO 条件下静置培养至