动物细胞工程中.ppt

2.2 动物细胞工程 一、常用技术 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体 1、概念 从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个的细胞，然后，放到适宜的培养基中，让这些细胞生长和增值。获得动物细胞或细胞产物。 2、培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 3、动物细胞培养条件 二、动物体细胞核移植技术: 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 三、动物细胞融合 1、概念： 也称细胞杂交，是指两个或多个细胞结合成一个细胞的过程 2、方法： 聚乙二醇，灭活的病毒，电激等 3、融合过程 细胞膜融合 细胞质融合 细胞核融合 阅读课本第52-54页思考： （1）请概括单克隆抗体的概念 （2）根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案，思考实验过程与原理？ （3）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？制备过程为何要经过两次筛选？ 1.概括单克隆抗体的概念 实验目的:制备单克隆抗体. 实验原理： 实验材料：小白鼠 实验器材：培养皿、针筒等等。 实验过程：？ （1）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？ 单克隆抗体有何应用？ 主要用于疾病的诊断、治疗和预防。与常规抗体相比，具有特异性强、灵敏度高的优点。如；各种癌症、肝炎病毒、SARS病毒、细菌及血吸虫等数百种疾病的诊断；在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士，能识别“自己”与“异己”，一旦发现 致病因素便与之结合将其杀死。若在单抗上带上抗癌药物制成“生物导弹”，将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞。 因为B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下大量增殖的本领，所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。 细胞融合技术、细胞培养技术。 第一次筛选得到杂交瘤细胞，第二次筛选先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞下培养筛选出特异抗体的细胞群。 动物细胞培养技术的应用 （1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干 扰素、单克隆抗体等。 （2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 （3）用于检测有毒物质 （4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 这只老鼠身上的“人耳”是由我国科学家曹谊林教授利用细胞工程技术复制出来的。 拓展：聚乙二醇处理后，培养液中存在哪几种细胞？ 脾-脾 脾-瘤 瘤-瘤 未融合的脾细胞 未融合的瘤细胞 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断，人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂交瘤细胞，请回答：　　（1）试管中除融合的杂交瘤细胞外，还有_____________种融合细胞。　　（2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂交瘤细胞，并说明原理。　　方法： 原理： 试试身手 解析：　　（1）试管中有人的淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞，在促溶剂的作用下，可能出现以下3种细胞的融合情况，人的淋巴细胞和淋巴细胞融合，小鼠的骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合，人的淋巴细胞和小鼠的骨髓瘤细胞融合，实验需要的是第3种细胞，即杂交瘤细胞；　　（2）要将杂交瘤细胞分离出来，可以在培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞；加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。 变式训练 生产单克隆抗体时，要在培养液中加入某种试剂才能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂 A．能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制 B．能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 C．选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制 D．能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成 （3）将分离出的杂种细胞在不同的条件下继续培养，获得A、B、C三细胞株，各细胞株内含有的人染色体如下表所示（“＋”有，“－”无）  细胞株 人染色体编号 1 2 3 4 5 6 7 8 A株 ＋ ＋ ＋ ＋ － － － － B株 ＋ ＋ － － ＋ ＋ － － C株 ＋ － ＋ － ＋ － ＋ － 测定各细胞株内人体所具有的5种酶的活性，结果