叶酸的能量转移荧光测定法及其应用.pdfVIP

第28卷 第 1期 应 用 化 学 VO1．28 Iss．1 2011年 1月 CHINESEJ0URNALOFAPPLIED CHEMISTRY Jan．2011 叶酸的能量转移荧光测定法及其应用 郭 蒙 杨景和 (。潍坊学院化学化工学院 潍坊 261061；山东大学化学与化工学院 济南) 摘 要 报道了一种灵敏检测叶酸的荧光新方法。在叶酸一KMnO一Eu”一HO体系中，以pH=4．7的乙酸一乙 酸钠 (浓度为0．2mol／L)为缓冲溶液 ，利用高锰酸钾和过氧化氢将叶酸氧化形成蝶呤_6一羧酸，与Eu“配位成 配合物，该配合物被激发后，蝶呤 一羧酸通过分子内能量转移将吸收的能量传递到 Eu ，从而发射出Eu”的 特征荧光。在 4×10一～4x10。molfL范围内，Eu“的荧光强度 与叶酸的浓度呈线性关 系，相关系数为 0．9902，检测限达到 1．2×10一molfL。用于实际样品中叶酸的检测，得到了满意的结果。 关键词 叶酸，铕 ，荧光 中图分类号：0657 文献标识码 ：A 文章编号：1000-0518(2011)01-0101-06 D0I：l0．3724／SP．J．1095．2011．00174 CH2--NH ：一 一 N＼ ＼-- 60旷 叶酸是一种抗贫血药，主要用于巨幼红细胞性贫血，也用于恶性贫血的辅助治疗。同时，叶酸有望 成为抗癌治疗靶点，用于肿瘤诊断 ¨。。因此建立灵敏的叶酸测定方法具有十分重要的意义。 目前常用的叶酸检测方法有：分光光度法、电化学法、高效液相色谱法、微生物法和荧光法等，但是 这些方法灵敏度和选择性较低 。由于稀土元素具有光谱线宽较窄、激发态寿命长、stocks位移大、与 生物分子结合能力强等优点，常用于核酸H J、蛋 白质l1H和药物 ¨ 等的定量测定。本文报道的新 荧光检测叶酸的方法，是将叶酸用高锰酸钾氧化形成蝶呤．15一羧酸，再与Eu“结合成配合物，该配合物被 激发后，蝶呤吸收的能量通过分子 内能量转移传递到Eu“，从而发射 Eu”的特征光谱。该测定方法利 用分子内能量转移将荧光发射峰由紫外区移至可见光区，避免了在紫外区的干扰，快速而且灵敏，选择 性较强。 l 实验部分 1．1 仪器和试剂 LS一55型荧光分光光度计 (美 国PE公司)，激发和发射狭缝宽度均为 10nm，波长扫描速度为 500nm／min；pHS一3B型精密酸度计；UV-240型紫外吸收分光光度计 (日本Shimadzu公司)。 三氧化二铕 (99．99％)；叶酸(98％，美 国Sigma公司)；高锰酸钾 (99．5％)；过氧化氢 (30％)；叶酸 片，标示值 5mg／片；所用试剂均为分析纯或生物纯，用三次蒸馏水配制。 1．2 实验方法 在 25mL的比色管中，依次加入一定体积的叶酸溶液，3．0mL乙酸一乙酸钠缓冲溶液，0．1mL高锰 2010-03-26收稿 ，2010-05—19修 回 国家 自然科学基金 和潍坊市科技发展计划(2060402)资助项 目 通讯联系人：郭蒙，工程师；Tel：0536—8785283；E—mail：guomeng7101@126．eom；研究方向：功能配合物、生物分析化学 应 用 化 学 第28卷 酸钾溶液，摇匀，在80qC恒温水浴中加热4min，取出后迅速加入0．2mL过氧化氢溶液，剧烈振摇，冷却 后加入 1mLEu¨溶液，稀释至 10mL。静置 5rain后，用 1cm 比色皿在激发波长 343nm、发射波长 620nm处测定体系的相对荧光强度 ，r(％)(与最大荧光强度之比)。 2 结果与讨论 2．1 缓冲溶液及 pH值 溶液的酸碱度对体系荧光强度的影响如图1所示 。从图1可以看出，当溶液的pH值在4．70±