新型游离三碘甲腺原氨酸人工抗原的合成与表征.pdfVIP

第30卷 第 11期 应 用 化 学 V01．30Iss．11 2013年 11月 CHINESEJ0URNAL OFAPPLIED CHEMISTRY NOV．2013 新型游离三碘 甲腺原氨酸人工抗原的合成与表征 印晓梅 于海涛 王小龙 (南京中医药大学药学院 南京210046) 摘 要 利用快速 、温和的 “ClickChemistry(点击化学)”反应，在游离三碘甲腺原氨酸 (兀 )的羧基上引入一 个带有三唑环的羧基 “间接臂”，生成半抗原(FT，C)。再用 Ⅳ_羟基琥珀酰亚胺活性酯法 ，将半抗原(FFC)分 别与牛血清白蛋 白(BSA)和钥孔戚血蓝素 (KLH)偶联，合成了免疫抗原(fTr。C-BSA)和包被抗原(FT，C— KLH)。免疫抗原(F1C—BSA)的紫外吸收光谱相对于FT3c和BSA有明显差异，表明成功实现了偶联 ，经计算 得到偶联比为7：1；用 盯，C—BSA免疫 Balb／c小鼠，获得高效价的抗 FT，血清。采用间接ELISA法检测抗体的 Ic值为0．37mg／L，抗血清效价可达6．24×10，是制备Fr3人工抗原的一种新方法。 关键词 游离三碘甲腺原氨酸，点击化学，半抗原，人工抗原 中图分类号 ：0629．8 文献标识码：A 文章编号：1000-0518(2013)11—1281-04 DOI：10．3724／SP．J．1095．2013．20570 三碘 甲腺原氨酸 (T)是人体中随血液循环的一种 甲状腺激素。在血液中，绝大部分与载体蛋 白结 合，只有少量是游离态的，而只有游离三碘 甲腺原氨酸(FT)才具有生物学活性。 不受结合蛋 白生理 性增加和病理性减少的影响 (血液中与蛋白结合的T的量受其影响)。因此，血清中Fr的检}贝4对急 性心肌梗塞 J、糖尿病 和肾病 等的临床诊断有一定意义。 “ClickChemistry(点击化学)”是2002年Sharpless提出的有机合成新技术 ，具有合成操作简单、 条件温和、产物稳定、收率高和选择性好等优点 。目前，在常规的丌，人工抗原合成中，为避免连接臂 中含较强的决定簇 (如芳环、共轭双键或杂环等)，减少抗体对连接臂的过度识别而降低对 目标分子的 识别能力，通常以直链烷基作为连接臂与蛋白偶联 引。本课题组已报道过选择游离甲状腺素FT4上的 羧基为修饰位点，通过亚铜盐催化的叠氮与端炔的偶联反应制备以三唑杂环作为连接臂的人工抗原，并 获得了高效价抗体血清，但抗体特异性较差 。本文采用相似的合成方法，制备了结构新颖的FT3人 工抗原。用此抗原得到免疫 鼠血清是高效价的FT3抗血清，并从中分离得到高特异性的抗体，为FT3的 免疫分析检测提供了可靠的免疫原，合成路线如 Scheme1所示。 C∞ H co COOH HATu 3(aq．) H。 。 Boc2O H。 。 O ，r 广 OH BSA EDCHCl ∞ 。 2012-12—10收稿 ，2013-03—18修回 江苏省 自然科学基金 (BK2011813) 通讯联系人：于海涛，讲师；Tel／Fax：025E—mail：njubilly@gmail．corn；研究方向：药物的有机合成