第七章特殊毒性及其试验与评价方法3.pptVIP

动物种属的选择，应考虑受试物可能作用的靶器官。 大鼠 肝癌 小鼠 呼吸道和肺肿瘤 金黄仓鼠、狗或猴 膀胱癌 靶器官无法估计 大鼠和小鼠 （3）病理检查 动物自然死亡或处死后必须及时进行病理检查，包括肉眼和组织切片检查。组织切片检查应包括已出现肿瘤或可疑肿瘤的器官和肉眼检查有明显病变的器官，应注意观察癌前病变。通过病理检查确定肿瘤的性质和靶器官。 ⑦结果分析 统计各种肿瘤的数量(包括良性和恶性肿瘤)及任何少见的肿瘤、患肿瘤的动物数、每只动物的肿瘤数及肿瘤潜伏期。 肿瘤发生率(％)＝(实验结束时患肿瘤动物总数/有效动物总数)×100％ 式中，有效动物总数指最早发现肿瘤时存活动物总数。 结果报告： 应着重报告发现肿瘤的部位、数量、性质、癌前病变，以及其他毒性效应； 应报告剂量-反应关系及统计学分析结果。 如在动物组织中观察到良性和恶性肿瘤，并有良性肿瘤向恶性化进展的证据，在进行统计学分析之前将良性和恶性肿瘤合并是适宜的，但仍希望分别对良性和恶性肿瘤分别进行统计学处理。 ①小鼠皮肤肿瘤诱发试验 于小鼠皮肤局部连续涂抹受试物，以观察皮肤乳头瘤和癌的发生，一般20周可结束实验，较敏感的小鼠为SENCAR小鼠。此试验也可设计为检测受试物的引发活性或促长活性。 典型的引发剂为致癌性多环芳烃，促长剂为佛波醇酯(TPA)。 ②小鼠肺肿瘤诱发试验 染毒途径常用腹腔注射，也可灌胃或吸入，一般16~30周可结束实验，观察肺肿瘤的发生。较敏感的小鼠为A系小鼠。此试验也可设计为检测受试物的引发活性或促长活性。 典型的引发剂为乌拉坦（抗肿瘤药物），促长剂为二丁基经基甲苯(BHT)。 ③大鼠肝转化灶诱发试验 对大鼠进行肝大部切除术后，给以受试物，一般可在8～14周结束实验，观察肝转化灶生成。肝转化灶是癌前病变，有γ-谷氨酰转肽酶活性升高，G6P酶和ATP酶活性降低，以及铁摄取能力降低。转化灶可用组织化学或免疫化学方法鉴定。此试验也可设计为检测受试物的引发活性或促长活性。典型的引发剂为二乙基亚硝胺(DEN)，促长剂为苯巴比妥(PB)。 ④雌性大鼠乳腺癌诱发试验 一般可用SD大鼠(或Wistar大鼠)，实验周期为6个月。多环烃芳香胺、氯烷、亚硝基脲等能在9个月以内诱发乳腺癌。 此四个试验不是成组试验，应根据受试物的特点选择使用。此四个试验任一试验得到阳性结果的意义与长期动物致癌试验相似，但阴性结果并不能排除受试物的致癌性。 （1）转癌基因小鼠 与转录启动子连接的癌基因转入后可直接在某些特定的组织中高效表达，使该组织细胞处于引发状态，这类转基因动物是研究化学物致癌作用的敏感体系。携带癌基因的转基因动物可用于致癌试验，试验周期仅3个月左右，有希望发展成代替长期动物致癌试验的试验系统。 这些携带有癌基因的转基因动物，可用来研究外源化学物与肿瘤相关基因的作用及外源化学物在致癌不同阶段中的作用机制。以各种组织特异性的促长剂处理转入不同癌基因的小鼠，可为致癌过程的研究提供新线索。 （2）肿瘤抑制基因敲除小鼠 在P53-/-小鼠，肿瘤(特别是淋巴肉瘤)的发生比正常小鼠(P53+/+)增加而且提前。由于P53-/-小鼠的肿瘤发生具有组织特异性，进一步研究这些肿瘤的遗传学基础有助于鉴定P53基因的功能。而半合子小鼠(P53+/-)在出生后6个月内自发癌发生率低，但在之后发生淋巴瘤和软组织肉瘤，其中大部分丢失P53野生型等位基因。这种小鼠对遗传毒性致癌物敏感性并不增加。这种半合子小鼠也可用于鉴定致癌过程中的协作基因。而且缺P53小鼠加速形成恶性肿瘤，提示此基因主要在进展阶段起作用。P53在肿瘤发生中的作用有待进一步研究。 （3）转穿梭质粒的转基因动物小鼠 转入带有报告基因的穿梭载体，是研究体内基因突变的转基因动物模型。 常用的靶基因如lacI、lacZ可通过噬菌体体外包装等方法，从小鼠基因组内回收，再在大肠杆菌内检测靶基因突变，可为研究不同器官基因的自发突变和诱发突变的分子机制提供有效的方法 。 四、致癌物的最终确定 　　人类致癌物的确定主要根据：流行病学调查结果能够重复；有剂量反应关系；有动物致癌试验阳性结果支持。 　　对动物致癌物的确定有的认为只要有一种动物试验结果为阳性，甚至是哺乳动物短期致癌试验阳性，即可认为致癌；有的则要求在多种或多品系动物试验中，或在几个不同试验中，特别是不同剂量或不同染毒途径见恶性肿瘤发生率增高；或在肿瘤发生率、出现肿瘤部位、肿瘤类型或出现肿瘤的年龄提前等各方面极为明显突出，才能确定为动物致癌物。 癌基因：能引起细胞恶