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生物秀实验频道——努力做您的实验助手 ！  /bio101/  反向遗传操作技术 反 向 遗 传 操 作 技 术 生物秀搜集整理 生 物 秀 搜 集 整 理 w w w . b b i o o . c o m 反向遗传操作技术( reverse genetics)与经典的从表型改变到进行基因特征研究的思 路相反，是指通过构建 RNA病毒的感染性分子克隆，在病毒 cDNA 分子水平上对其进行体 外人工操作，也被称为“病毒拯救( the rescue of  virus) ”。 反向遗传学是相对于经典遗传学而言的。经典遗传学是从生物的性状、表型到遗传物质 来研究生命的发生与发展规律。反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上，通 过对靶基因进行必要的加工和修饰，如定点突变、基因插入\缺失、基因置换等，再按组成 顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组，让其装配出具有生命活性的个体，研究生物体基 因组的结构与功能，以及这些修饰可能对生物体的表型、性状有何种影响等方面的内容。与 之相关的研究技术称为反向遗传学技术。  RNA病毒的反向遗传学,是采用病毒的遗传材料,在培养细胞或易感宿主中重新拯救出活病 毒或类似病毒物质。 能够拯救病毒的遗传材料称为感染性克隆,一般是在细菌质粒中含有整个 病毒基因组的 cDNA 拷贝,使得 cDNA 本身或从 cDNA 体外转录所得的 RNA 具有感染性。  RNA 病毒的反向遗传系统通过定向修饰病毒的基因组序列,检测被拯救的人工改造病毒的表 型,可以在体内(in vivo)有效地研究病毒基因结构、功能和病毒­宿主相互作用。自 1978年 第一例 RNA 病毒 Qβ噬菌体的成功拯救以来,各类 RNA 病毒的分子生物学研究取得了长足 的进展,这主要归功于各种 RNA病毒反向遗传系统的建立和发展。该技术的核心是首先构建  RNA 病毒的全长 cDNA分子，并使之受控于 RNA 聚合酶启动子，通过体外转录过程再次得 到病毒 RNA，然后将该转录物 RAN 转染哺乳动物细胞可拯救到活病毒，由于这种拯救病毒 是来 自全长 cDNA 分子,因此可以在 DNA 水平上对病毒基因组进行各种修饰或改造,然后通 过拯救病毒的表性变化来判断这些基因操作的效果,从而达到对病毒基因组表达调控机制,病 毒致病的分子机理等进行研究的目的,甚至还可以得到减毒毒株，开发新型的疫苗。目前已有 许多 RNA病毒的全长感染性 cDNA克隆构建成功。 俺就是搞流感病毒的反向遗传的， 而且， 现在搞得非常的溜， 拯救的成功率是 90%以上。 先贴上我的论文中对此领域的背景介绍：  The earliest reverse genetics techniques for negative stranded RNA viruses were  developed only for influenza A virus in deed (Enami et al., 1990; Luytjes et al.,  1989). But for a long time, the fundamental research of this virus has been  hampered by the lack of the efficient reverse genetics systems. The rescue of 中国生物科学论坛【生物秀论坛】  1  /bbs/  生物秀实验频道——努力做您的实验助手 ！  /bio101/  influenza virus entirely from cDNA was finished in 1999 (Fordor et al., 1999;  Neumann et al., 1999). Such plasmid­driven synthesis of viral RNA and protein  allows the recove