第四章分子生物学酶学及载体部分.pptVIP

基因工程的操作过程 DNA的体外重组（切、接） 重组DNA分子的转化和扩增（转、增） 转化子的筛选和鉴定（检） 基因工程的操作过程 DNA的体外重组（切、接） 限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶的发现及其生物功能；限制酶的分类与命名；Ⅱ型限制酶的特性与DNA切割；影响限制性核酸内切酶活性的因素； DNA连接酶 基本性质；连接作用；影响连接反应的因素； DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶；Klenow fragment；T7 DNA聚合酶；T4 DNA聚合酶；修饰过的T7 DNA聚合酶；逆转录酶； 核酸修饰酶 核酸酶；碱性磷酸单酯酶；T4多核苷酸激酶；末端转移酶。 1.限制性核酸内切酶 核酸酶是通过切割相邻的两个核苷酸残基间的磷酸二酯键，导致多核苷酸链共价键断裂的一类水解酶。 按水解底物可分为核糖核酸酶(RNase)和脱氧核糖核酸酶(DNase)。 按其水解断裂核酸分子的不同方式： 核酸外切酶(exonuclease)：从核酸末端顺次水解磷酸二酯键； 核酸内切酶(endonuclease)：从核酸内部磷酸二酯键。 限制酶的分类与命名 限制性内切酶是微生物细胞中用于专门水解外源DNA的一类酶，其功能是避免外源DNA的干扰或噬菌体的感染，是细胞中的一种防御机制。 由于R/M现象的发现使得核酸内切酶成为基因工程重要的工具酶。 根据酶的功能、大小和反应条件，及切割DNA的特点