DPPH和FRAP法测定苦参中抗氧化物的活性.docVIP

分 离 纯 化 技 术 课程论文 学院：生命科学技术学院 班级：10级生技植物班 学号：2010193023 姓名：李胜程 DPPH法和ＦＲＡＰ法测定苦参体外抗氧化活性 李胜程 （甘肃农业大学,兰州，730070） 摘要: 为了测定苦参中抗氧化的活性。实验采用粉碎机研磨破碎细胞，无水乙醇、水、乙酸乙酯、甲醇作溶剂加热对药物进行提取，抗氧化能力的测定使用分光光度计，应用DPPH（二苯代苦味酰基自由基） 和FRAP（铁离子还原法）进行测定。通过测定苦参提取液对DPPH 自由基的清除能力和FRAP 值，表征其抗氧化能力[1]。结果表明: 根据DPPH法测得,苦参的4种提取物对DPPH自由基的清除能力表现为:?蒸馏水乙酸乙酯甲醇无水乙醇。采用铁还原/抗氧化能力（FRAP法）测得抗氧化性由大到小为:乙酸乙酯甲醇无水乙醇蒸馏水。 关键词：苦参;抗氧化物;DPPH;分光光度计;FRAP; 苦参, （英文名Ligh tye llow Sophora Root）别名为野槐根、山槐根、干人参、苦骨。属豆科植物, 落叶亚灌木。根黄色。苦参又叫地参, 以叶似槐, 所以又叫野槐,为豆科槐属植物, 根部入药。秋冬二季采挖, 除去根头及泥土, 晒干切片备用[2]。中医学上以根入药, 性寒, 味苦。主治清热燥湿, 杀虫利尿; 用于热痢、便血、黄疸尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤瘙痒、疥癣麻风; 外治滴虫性阴道炎[3]。通过现代医学分析化验, 苦参根含有多种苦参碱, 如苦参碱( mat rine) 、氧化苦参碱( oxymat rine ) 、羟基苦参碱( sophoranol ) 、别苦参碱( allomat rine) 、野靛碱( cyt is ine) 、甲基野靛碱( methlcyt isine ) 、臭豆碱( an agyrine) 、赝靛叶碱( b apt if oline) , 还含有黄酮类、皂甙类、氨基酸类、脂肪类、挥发油等复杂化合物, 并由此产生多种药理作用[4]。 实验部分 1.1.仪器 粉碎机、旋转蒸发器、紫外可见分光光度计、电子天平、水浴锅、离心机、三角瓶、量筒、25ml容量瓶、离心管、带塞三角瓶、移液枪、试管架 1.2.试剂 DPPH（二苯代苦味酰基自由基）、 TPTZ、 ASA、 蒸馏水、无水乙醇、乙酸乙酯、甲醇、苦参、FRAP 工作液（10ml乙酸钠缓冲液、1mlTPTZ、1mlFeCl3现配现用） 1.3.实验方法 1.3.1.提取液的制备 1.3.1.1.乙酸乙酯提取：打开恒温水浴锅，把温度设置成90℃，把回流系统的圆底烧瓶放在水浴锅内，冷凝管与圆底烧瓶连接，倒入定量的乙酸乙酯，接冷水（下进上出）进行回流2个小时。裁取一张滤纸制作成药包，称量5g苦参倒入药包中将药包放入回流系统中。回流后把液体平均倒入两个大的离心管中，在4000r/min下离心20min。离心完后把上清液倒入蒸发浓缩系统中进行浓缩，待快蒸发干时则停止，取出烧瓶，用甲醇定容止25ml。 1.3.1.2.蒸馏水提取：将50ml的蒸馏水和5g的苦参加入三角瓶中，轻轻摇动，放入40℃的水浴锅加热3个小时。3个小时后平均倒入两个离心管中，接着把离心管放在4000r/min离心2min。然后放在接好的蒸发浓缩系统中进行蒸发浓缩，待快蒸发干时则停止，取出烧瓶，用甲醇定容到25ml。 1.3.1.3.甲醇提取：将50ml的甲醇和5g的苦参加入三角瓶中，轻轻摇动，放入40℃的水浴锅加热3个小时。3个小时后平均倒入两个离心管中，接着把离心管放在4000r/min离心2min。然后放在接好的蒸发浓缩系统中进行蒸发浓缩，待快蒸发干时则停止，取出烧瓶，用甲醇定容到25ml。 1.3.1.4.无水乙醇提取：将50ml的无水乙醇和5g的苦参加入三角瓶中，轻轻摇动，放入40℃的水浴锅加热3个小时。3个小时后平均倒入两个离心管中，接着把离心管放在4000r/min离心2min。然后放在接好的蒸发浓缩系统中进行蒸发浓缩，待快蒸发干时则停止，取出烧瓶，用甲醇定容到25ml。 1.3.2．DPPH清除率和FRAP值的计算 DPPH清除率的计算：清除率﹪=（A0-A30min）/A0×100% FRAP值的计算：FRAP=(A4min-A0)/AFeSO4×500ul 1.3.3．结果与分析 表1.苦参不同物质提取物的FRAP值 苦参不同物质提取物的值 0.632 0.797 无水乙醇 0.104 0.632 0.835 甲醇 0.120 0.632 0.810 蒸馏水 0.257 0.632 0.654 ASA 0.115 0.632 0.818 通过表1与表2的数据得到清除率和FRAP值的柱状图如下： 为开发高效天然抗氧化剂，一般先用