2017-2018年高中生物 第1章 微生物培养技术 第1节 微生物的分离和纯培养学案 中图版选修1.docVIP

第一节 微生物的分离和纯培养 一、培养基 1．含义 由于微生物代谢方式的不同，因而对营养物质的需求也是有差异的。根据微生物生长繁殖和代谢的需要，将各种营养物质混合在一起而配制的营养基质。 2．平板培养基 将溶化后的固体培养基基质倒入无菌培养皿中，冷却凝固后制成的培养基。 二、无菌技术 1．目的和要求 在微生物的分离和纯培养中，一定不能有外来的污染性杂菌，所以必须采用无菌技术进行操作。因此，在实验过程中，要对所用的器材、培养基进行严格的灭菌，对工作场所要进行消毒。 2．灭菌和消毒 (1)灭菌：用强烈的理化因素杀死环境或物体内外所有的微生物，常用的方法是高温灭菌法。 (2)消毒：用相对温和的理化方法杀死环境或物体上的病原微生物和有害微生物的营养细胞，常用的方法是射线消毒法和化学药剂消毒法。 三、接种技术 1．含义 把相应的研究对象移入培养基中的过程。 2．分类 在平板培养基上接种的方法有平板划线法、稀释平板涂布法、稀释混合平板法等。 预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题1 问题2 问题3 问题4 一、微生物的概念及特点 1．概念 微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。 2．特点 微生物 微生物 二、微生物的营养及功能 微生物的化学组成成分与其他生物大体相同，也是由C、H、O、N、P、S等元素组成，其中C、H、O、N占细胞干重的90%以上，这些元素最终来自外界环境中的各种无机化合物和有机化合物。这些化合物可归纳成碳源、氮源、生长因子、无机盐和水这五大类营养要素。 营养物质 定义 作用 主要来源 碳源 凡能提供所需碳元素的物质 构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质 无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等 氮源 凡能提供所需氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物 无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 生长因子 生长必不可少的微量有机物 酶和核酸的组成成分 维生素、氨基酸、碱基等 水 在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高 不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定 外界摄入 无机盐　 为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素 细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂 无机化合物 ①微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。 ②在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源，新陈代谢同化作用类型的划分也是根据是否能合成含碳有机物为依据，能合成含碳有机物的是自养型，反之则为异养型。 ③对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源又是氮源、能源。 ④微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可为微生物提供生长因子。 三、大肠杆菌的分离方法和实验过程 1．实验原理 微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种。 2．材料用具 培养16～24 h的大肠杆菌(E.coli)培养液，灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基斜面和平板，盛有9 mL无菌水的试管，无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环等。 3．方法步骤 微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤。 微生物分离操作流程图 (1)稀释　用1 mL无菌吸管吸取 1 mL大肠杆菌培养液，加入到盛有9 mL无菌水的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1 mL加入另一支盛有9 mL无菌水的试管中，混合均匀，依次制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀释度的大肠杆菌稀释液。 (2)划线或涂布 平板划线分离法：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，沾取大肠杆菌培养液在平板上划线，常用的划线方法有交叉划线和连续划线两种(如下图)。交叉划线时，每转一个角度烧一次接种环。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。 划线法示意图 涂布分离法：取3个平板，底面分别用记号笔写上10－4、10－5和10－6三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1 mL，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5～10 min，使菌悬液吸附进培养基(如下图)。 涂布法示意图 (3)培养　将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37 ℃培养16～24 h，即可长出单个的菌落。 四、平板划线操作应注意的问题 第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，