离子交换层析结合反向色谱纯化聚二氨基丙酸.pdfVIP

第 １２卷第６期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１２ Ｎｏ６ ２０１４年１１月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｎｏｖ２０１４ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１４０６０１１ 离子交换层析结合反向色谱纯化聚二氨基丙酸 夏　 军，许召贤，薄芳芳，冯小海，迟　 波，徐　 虹 （南京工业大学 食品与轻工学院，南京 ２１１８００） 摘　 要：ε 聚赖氨酸生产菌株Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ＰＤ １可合成一种新型非蛋白质氨基酸均聚物聚二氨基丙酸，采 用离子交换层析和反向色谱，对聚二氨基丙酸的分离纯化进行研究。 离子交换层析柱选用ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ填料，５０ ｍｍｏｌ／ Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ７５）平衡上样，含０５ ｍｏｌ／ Ｌ ＮａＣｌ 的磷酸盐缓冲液（ｐＨ７５）洗脱，收集洗 脱液用分子筛Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ ２５ 除去磷酸盐缓冲液。 然后用 Ｃ 反相色谱进一步纯化，流动相为 Ｖ（甲醇）／ １８ ＝ Ｖ（０１％磷酸） ５／ ９５。 经过离子交换层析和反向色谱，纯化得到聚二氨基丙酸纯品，回收率为３９８％，样品纯度达 ９８４％，为后续的聚二氨基丙酸的深入研究奠定基础。 关键词：聚二氨基丙酸；纯化；离子交换层析；反向色谱 － － － 中图分类号：ＴＱ０２８８　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１４）０６ ００５７ ０５ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙ （Ｌ⁃ｄｉａｍｉｎｏｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ） ｂｙ ｉｏｎ⁃ｅｘｃｈａｎｇｅ ａｎｄ ｒｅｖｅｒｓｅｄ⁃ｐｈａｓｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ＸＩＡ Ｊｕｎ，ＸＵ Ｚｈａｏｘｉａｎ，ＢＯ Ｆａｎｇｆａｎｇ，ＦＥＮＧ Ｘｉａｏｈａｉ，ＣＨＩ Ｂｏ，ＸＵ Ｈｏｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｌｉｇｈｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ε⁃ｐｏｌｙｌｙｓｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ＰＤ⁃１ ｃｏｕｌｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅ ａ ｎｏｖｅｌ ｎｏｎ⁃ ｐｒｏｔｅｉｎｉｃ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｏｌｉｇｏｍｅｒ：ｐｏｌｙ（Ｌ⁃ｄｉａｍｉｎｏｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ） （ＰＤＡＰ）Ｉｏｎ⁃ｅｘｃｈａｎｇｅ ａｎｄ ｒｅｖｅｒｓｅｄ⁃ ｐｈａｓｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ＰＤＡＰＩｎ ｔｈｅ ｉｏｎ⁃ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＤＥＡＥ⁃Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ，５０ ｍｍｏｌ／ Ｌ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅａｎｄ０５ｍｏｌ／ ＬＮａＣｌ ｉｎｔｈｅｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ ａｃｔｅｄａｓｅｌｕｔｉｏｎＩｎｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｄ⁃ｐｈａｓｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｒａｔｉｏｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌｔｏ０１％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄｗａｓ５／ ９５ （Ｖ／ Ｖ）ａｎｄｗａｓｕｓｅｄａｓ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅｐｈａ