人源抗菌肽LL-37在毕赤酵母中的高效表达和其活性检测.PDFVIP

微生物学通报 APR 20, 2008, 35(4): 539~544 Microbiology © 2008 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 人源抗菌肽 LL-37 在毕赤酵母中的 高效表达及其活性检测 申艳敏1, 2 魏建超 1 尚书文 1, 2 牛明福 1 周玉珍 1, 2 周 斌 1 曹瑞兵 1 陈溥言 1 侯继波 2* (1. 210095) (2. 210014) 摘 要: 根据 GenBank CAA86115 中的LL-37 氨基酸序列, 选择毕赤酵母偏好密码子, 采用SOE 方法合成了人源抗菌肽LL-37 基因。所合成的 LL-37 基因全长为 141 bp, 并在其N 端引入kex2 裂解位点, 以保证表达抗菌肽具有天然N 端。基因克隆入 pPICZα-A 质粒, 构建分泌型重组酵母 表达载体 pPICZα-A-LL-37 。pPICZα-A-LL-37 经 Sac 酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株 X-33 。PCR 鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌LL-37 于发酵上清液, 其表达量为206 mg/L 。 表达产物LL-37 耐热性强, 在 100℃条件下40 min 内抗菌活性不变, 煮沸3 h 以上仍具有活性。琼 脂糖孔穴扩散法检测显示 LL-37 对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有很好的抑制活性, 其对金黄 色葡萄球菌 Cowan Ⅰ(Staphylococcus aureus) 、致病性大肠杆菌K99(Enteropathogenic E.coli)和鸡 白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum) 的最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration, MIC)分别为 1.56 μg/mL 、3.12 μg/mL 和 1.56 μg/mL 。 关键词: 抗菌肽LL-37, 基因设计, 分泌表达, 活性检测 High Expression of the Human Antibacterial Peptide LL-37 in Pichia pastoris and the Detection of Its Activity SHEN Yan-Min1, 2 WEI Jian-Chao1 SHANG Shu-Wen1, 2 NIU Ming-Fu1 ZHOU Yu-Zhen1, 2 ZHOU-Bin1 CAO Rui-Bing1 CHEN Pu-Yan1 HOU Ji-Bo2* (1. Key Laboratory of Animal Disease Diagnosis and Immunology, Ministry of Agriculture in Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095) (2. National Veterinary Biological Medicine Engineering Research Center,