Graves病伴血细胞减少症患者外周血淋巴细胞的研究论文.docVIP

　　Graves病伴血细胞减少症患者外周血淋巴细胞的研究论文 【摘要】 为了研究Graves病伴血细胞减少症患者外周血淋巴细胞的变化，探讨Graves病伴血细胞减少症的发病机制，以流式细胞术测定24例患者外周血Th细胞亚群及CD5+B淋巴细胞的数量、B淋巴细胞胞浆内凋亡蛋白Bcl2的表达水平，并与18名正常人作对照。结果表明：正常对照组Th1细胞和Th2细胞百分率、 Th2/Th1 比值、CD5+B细胞百分率、Bcl2表达率分别是(0.39±0.24)%、（0.28±0.15）%、 （0.52±0.12）%、（7.89±0.38）%、（36.49±6.79)%；患者组Th1细胞和Th2细胞百分率、Th2/Th1 比值、CD5+B细胞百分率、Bcl2表达率分别是(0.81±0.45)%、（ 6.83±3.02）%、（20.55 ±6.15）%、（20.89±1.62）%、（80.25±15.56)%，均显著多于正常人对照（ P 0.05, P 0.01, P 0.01,P 0.05 ,P 0.05）。结论：Graves病伴血细胞减少症发病可能与Th1/Th2 比例失衡，Th2细胞增多，导致CD5+B细胞数量上升及凋亡减低，自身抗体的产生增加有关。 【关键词】 Graves病; 血细胞减少; 淋巴细胞; 免疫; 细胞凋亡 Lymphocyte Changes in Patients atocytopenia Abstract The aim of study phocyte changes in peripheral blood of patients atocytopenia and to explore its pathogenesis. The quantity and ratio of Th2、Th1 、CD5+B 、Bcl2 level in 24 Gravess disease patients atocytopenia al controls. The results indicaled that the percentages of Th1, Th2, ratio of Th2/Th1, CD5+B, Bcl2 leve in peripheral blood of the patients al controls［(0.39±0.24)% (P 0.05),( 0.28±0.15) % (P 0.01) , ( 0.52±0.12)% (P 0.01) , (7.89±0.38) % (P 0.05) ,(36.49±6.79) % (P 0.05)］. It is concluded that the pathogenesis of Gravess disease atocytopenia may be related to unbalance of Th1/Th2, increase of Th2 inducing overexpression of CD5+B and Bcl2 on B cell. Key atocytopenia; lymphocyte; immune; apoptosis Graves病由Parry于1825年首次报告.freela公司。流式细胞仪为Beckman Coulter公司产品。 外周血单个核细胞分离 采集患者及正常对照者的外周血4 ml,以5íTA抗凝，800 r/min离心10分钟，去上清，加入细胞培养液RPMI 1640至4 ml，混匀，用PBS等量稀释后分装于2个离心管中，用Ficoll淋巴细胞分离液（密度1.077)分离单个核细胞。 细胞培养及细胞因子分泌抑制 细胞按5×105 /ml的浓度培养，并加入PMA和依若霉素以扩大原有细胞因子的产量，用莫能霉素抑制高尔基体对细胞因子的转运。基本培养基为IMDM，体系如下：10%胎牛血清、2 mmol/L谷氨酰胺、50 μg/ml青霉素、50 μg/ml链霉素、50 ng/ml PMA、250 ng/ml依若霉素、140 ng/ml莫能霉素。细胞与培养液混合后加入到24孔板中，在37℃、95%湿度、5% CO2培养箱内培养5小时。 荧光染色 用结合异硫氢酸荧光素（FITC）的鼠抗人CD4单克隆抗体直接标记细胞膜CD4，用结合藻红蛋白荧光素的鼠抗人IFNγ、IL4单克隆抗体直接标记细胞浆内的IFNγ、IL4，Th1细胞为CD4+、IFNγ+，Th2细胞为CD4+、IL4+。 CD19+CD5+细胞测定 试管中加入鼠抗人CD19FITC和鼠抗人CD5PE各20 μl,再加入单个核细胞悬液100 μl，混匀，4℃避光孵育40分钟，PBS液洗2遍，加入10 g/L的多聚甲醛固定