WESTERNBLOT操作步骤图.pptVIP

打开夹子，取出膜，如果所用marker是预染marker,可见marker已经转移到膜上,如果不是预染marker，可以把膜转完后将膜用1×丽春红染液染5min，于脱色摇床上摇，然后用水冲洗掉没染上的染液就可看到膜上的蛋白。 将膜晾干备用。 将膜用TBS从下向上浸湿后，移至含有封闭液的平皿中 室温下脱色摇床上摇动封闭1h。 按所需稀释浓度滴加一抗（直接加在封闭液里）4℃ 过夜或37℃ 3h。 第二天取出膜，用TBST洗三次每次10min，然后加入TBS液中，按稀释浓度滴加二抗。室温孵育1h,再用TBST洗三次每次10min。最后DAB显色或者化学发光法显影。 WESTERN BLOTTING过程图解 图中绿色的是夹玻璃片的架子 玻璃板对齐后放入架中，把两侧的夹子卡紧。要使短玻璃靠外，长玻璃靠内。 然后垂直卡在架子上准备灌胶。操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。 图示两块玻璃板放在一个架子上。 配10％分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可