肺癌外周血液体活检：如何选择ctcs与ctDNA.pptVIP

ctcs与ctDNA检测意义 小结 肺癌外周血液体活检： 如何选择ctcs与ctDNA 肺癌外周血液体活检 “液体活检” 无创肿瘤筛查方法。 其来源主要分为： 循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs） 循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA, ctDNA） 方面一： 监测肿瘤动态，即复发转移早发现、早诊断、早治疗 方面二： 评估治疗效果，基于肿瘤状态终止，或调整治疗方案 ctcs 存在于外周循环的各类肿瘤细胞的统称 来自原发灶、转移灶或不明部位 癌症转移由CTCs导致。但大部分CTCs在外周循环中发生凋亡，或被吞噬，只有少数发展成为转移灶。 ctDNA 人体血液循环系统中不断流动的携带一定特征（包括突变，缺少，插入，重排，拷贝数异常，甲基化等）来自肿瘤基因组的DNA片段； 来源：1、来自于坏死的肿瘤细胞；2、来自于凋亡的肿瘤细胞；3、循环肿瘤细胞；4、来自于肿瘤细胞分泌的外排体； 含量低，约占整个循环DNA的1%，甚至只有0.01%。 ?目前常见免疫捕获技术（一代技术） ctcs检测技术 免疫捕获法 依靠抗体与细胞表面特定抗原结合进行分离 只能分离具有特定表面抗原（如EpCAM）的CTC 滤膜法 依据细胞大小进行分离 全面分离各类型CTC 其他 依据其他特征（如核质比、细胞密度等）进行分离 ctcs检测技术 CanPatrolTM—技术原理 ? ctDNA检测技术 已知突变位点检测 （突变率 2%） 数字PCR BEAMing技术 标记扩增深度测序（TAM-Seq） 癌症个体化深度测序 (CAPP-Seq) 敏感度 未知突变位点检测 （突变率 2%） 全基因组测序 全外显子测序 RNA末端平行分析法 全基因组甲基化测序 数字PCR 将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中，在每个反应器中包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA模板) ，实现“单分子模板PCR扩增”，扩增结束后，通过阳性反应器的数目“数出”目标序列的拷贝数。 阴性微滴比例推算 起始靶分子的绝对量 泊松分布 一个 待分析的PCR反应体系 成千上万个 独立的PCR反应体系 : 靶标分子 : 有限稀释 ●: 阳性微滴（1） ○: 阴性微滴（0） 优点：可绝对定量，灵敏度可达单个核酸分子，检测限低至0.001%； 缺点：只能检测已知的突变位点，通量低； CTC和ctDNA临床应用 ctDNA与CTC因其来源不同，评价标准不同，生物学特征不同，两者可能侧重 于不同方面的临床应用 通常来说，保证特异性前提下的高敏感度、便于临床应用、可重复性好是CTC与ctDNA检测技术的三个重要评判标准。较高敏感度可保证在数以亿计的背景细胞或者基因组中有效检出CTC或者ctDNA；便于临床应用是考虑该技术应用于临床的便利性（如检测时间、价格、所需样本大小等）；可重复性则保证了临床应用的可靠性。 疑问：关于CTC，外周血中的CTC大部分为具有转移倾向的，对其分子生物学特征的理解有助于我们探索肿瘤发生发展的机制； 关于ctDNA，ctDNA中检测出的基因变异（EGFR或者ALK）是否可以直接指导临床治疗，我们需要进一步的数据来证实。 * *