他莫西芬促进HeLa 宫颈癌细胞系增殖论文.docVIP

　　他莫西芬促进HeLa 宫颈癌细胞系增殖论文 邹自英，朱运龙，王高峰，钟延清，周华，刘亚莉 【关键词】 宫颈肿瘤 【Abstract】 AIM： To investigate oxifen is involved in the proliferation of cultured HeLa cell line, cervical carcinoma cell line of human beings. METHODS： The level of cell proliferation etry and laser scanning confocal microscope. RESULTS： Tamoxifen (1×10-7 mol L-1) shifted the curve upoxifen (1×10-8~1×10-6 mol L-1) significantly stimulated the cell proliferation and facilitated (1×10-6 mol L-1) G1/S transfer of the cell cycle as oxifen may modulate the proliferation and the differentiation of cultured HeLa cervical carcinoma cells by affecting the cell cycle and Ca2+ in the cells. 【Keyoxifen; cervix neoplasms;cell division 【摘要 】 目的： 研究他莫西芬（tamoxifen, TAM）对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响. 方法： 应用生长曲线测定、MTT、流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜等技术. 结果: TAM（1×107mol L1）使HeLa细胞的生长曲线向上移动；TAM（1×108~1×106 mol L1）可显著促进HeLa细胞增殖；TAM（1×106 mol L1）促进细胞G1/S期转化，并显著促进细胞内Ca2+释放. 结论： TAM可能对子宫颈癌细胞的生长和分化具有重要的调节作用,这种调节作用可能是通过影响细胞周期和胞内Ca2+水平而实现的. 【关键词】 他莫昔芬;宫颈肿瘤;细胞分裂 0引言 他莫西芬（tamoxifen, TAM）既是雌激素的拮抗剂又是其协同剂，这取决于雌激素受体是激活还是抑制靶基因.例如.freela), MTT(华美生物公司)，二甲基亚砜（Serva公司），furo3/AM(Sigma),酶联免疫检测仪（Beckman）, Elite ESP 流式细胞仪（Coulter公司），激光扫描共聚焦显微镜（BioRad）. 1.2方法 1.2.1HeLa细胞系培养将HeLa 细胞培养于DMEM培养基（DMEM 1 L中加Hepes 3.57 g，NaHCO3 2 g），置于37℃，50 mL L1CO2 培养箱中.培养的HeLa细胞可重叠生长，每3 d传代.传代时，移去旧培养液，DHank′s液冲洗2次，11加入EDTA和胰酶，消化2.5 min，离心后重悬于新培养瓶中，传代率为12或13. 1.2.2生长曲线的测定细胞按常规传代方法离心悬浮后，在倒置显微镜下用记数板记数，调整细胞数为1.8×107 L1，1 mL/孔接种24孔板，在37℃，50 mL L1CO2的培养箱继续培养.从第2日始，每日取3孔细胞进行记数，取平均值，共记数7 d.记数到第4日，给未记数细胞换新培养液. 1.2.3MTT比色实验用含50 mL L1小牛血清的DMEM将细胞制成5×107 L1的细胞悬液，接种于96孔培养板内，每孔100 μL.实验设阴性对照组和各种TAM药物浓度(1×109,1×108,1×107和1×106 mol L1)实验组.每孔加入含50 mL L1小牛血清的DMEM配制的药液100 μL，每种药物浓度8个孔，48 h后，每孔加入20 μL浓度为5 g L1的MTT，37℃培养箱继续培养4 h，去上清后，每孔加入150 μL二甲基亚砜，振荡器振荡10 min，测A490 nm值. 1.2.4流式细胞术细胞等量接种于2个25 mL培养瓶，第2日弃旧培养液，加入以含50 mL L1小牛血清的DMEM稀释的TAM（1×106 mol L1）药液2 mL，37 ℃培养箱培养48 h后，收集细胞.消化下来的细胞用2.5 mL PBS洗涤2次（800~1000 r min1离心,.freelin）,弃上清；加入1 mL PBS将细胞混匀，再加入2 mL无水乙醇立即振荡混匀，封口膜封口，4℃冰箱保存备用.送检时，用PBS洗涤2次，弃除无