五SEM样品制备技术NEW.pptVIP

第五章 SEM样品制备技术;第一节 SEM样品制备技术概述; 1. 使样品的表面形貌结构保持活体时的近 似形态,所观察的表面要求处理干净。 2. 对拟研究内表面结构，可采用冷冻断裂 技术获取一个新的观察面。 3. 尽可能在样品没变形的情况下除去水份， 即对样品进行“无损干燥”。 4. 样品表面应有良好的导电性能和二次电 子发射率。 5. 进行细胞化学研究时，要求标记物有一 定的形态，以便于识别。;三 样品制备的一般流程;第二节 样品制备的一般程序;（一）、样品的前处理一般过程 取材→清洗→固定→脱水 （二）、SEM与TEM在前处理中的区别 1. 样品大，一般6～100mm2,高厚5－10mm, 对于易卷曲的样品可固定在硬纸板或卡片纸上。 2. 特别注意表面清洁（生理盐水、缓冲液、 5%苏打水、超声波震荡、酶消化） 3. 固定时间适当延长，除了戊二醛、锇酸、高 锰酸钾外做固定液外，还有Paleace，Dalton 固定液 4. 脱完水时要用进入中间液进行置换。;（三）思考题 在TEM与SEM样品制备过程中，SEM制样在脱水后需要进行特殊干燥处理，而TEM超薄切片中脱水后无需干燥处理，分析其中原因。;二 样品的干燥;方法1：单固定或双固定→脱水→样品置于100％的脱水剂中→在空气中自然干燥； 方法2：固定→（组织导电处理）→浸泡在缓冲液与乙醚的1：1中5min→空气干燥； 方法3：单固定或双固定→乙醇脱水→浸没于六甲基二硅胺烷HMDS中二次每次15min→通风厨干燥1h;（二）、临界点干燥法(CPD: critical point dryer);3. 基本概念 临界点：物质的气态和液态两相之间达到相同密度、成为均一流体时的温度和压力的总称。此时的温度称为临界点温度，压力称为临界点压力。 中间剂：把用来置换脱水剂而后又被干燥剂所置换的液体。 ;4. 常用干燥剂;5. 常用中间剂： 中间剂：把用来置换脱水剂而后又被 干燥剂所置换的液体。 试剂：醋酸（异）戊酯、丙酮 6. 干燥过程： 固定脱水→转入中间液→移至样品 室→用液体CO2置换醋酸异戊 酯 →CO2汽化排气→干燥;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;7. CO2临界点干燥器工作原理;(1) 脱水不彻底 (2) 醋酸异戊酯反流 (3) 样表粘有过多醋酸异戊酯 (4) 样品量过多 (5) 样品室温度高，注入CO2困难注入 CO2量太少 (6) 样品室漏气; 样品块过大。组织块几何空间中心位置的 水份无法经脱水、中间剂置换、CO2置换等过程除去， CO2也无法完全置换掉中间剂，造成样品内外部由 液CO2（占95％－97％）、中间剂醋酸异戊酯2－3％ 样品中心位置游离态水份1－2％组成，在充分达到 CO2临界态的40－45℃，压力10－11MPa时，样品 几何中心位置游离态水由液体气化为水蒸汽时(液态 醋酸异戊酯由液体气化为蒸汽时）有表面张力的存在， 从而使样品有少量变形 (2) CO2放入或排出时 ,样表压力骤增减 (3) 生物样品本身性质决定及临界点干燥 本身的缺陷造成样品有少量变形;;玫瑰花瓣表面的SEM 照片(850X)，CPD ( critical point dryer)干燥 ;（三）、冰冻干燥;⑴ 基本描述：样品用乙醇或丙酮脱水后过渡到 某些易挥发的有机溶剂中，然后连同这些溶剂 一起冷冻并在真空中升华而达到干燥。 ⑵ 基本特点： 优点：可减少冰晶损伤，且干燥时间短。 缺点：有机溶剂对样品成分有抽提作用， 造成部分内含物丢失。; 氟里昂TF冷冻干燥 固定脱水→置换(氟里昂取代酒精) → 冷冻→干燥 乙醇冷冻干燥法 固定脱水→冷冻→干燥→升温取样 乙腈(acetonitrile)真空干燥法： 基本描述：CH3CN，甲基氰，气化热很大， 冷却后会固化、升华，利用乙腈在急速 蒸发时会冷却固化的性质将样品干燥。 一般流程：