HPLC法测定磺啶冰黄片中胆红素的含量论文.docVIP

　　HPLC法测定磺啶冰黄片中胆红素的含量论文 【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定磺碇冰黄片中胆红素含量的方法。方法 采用HPLC法进行测定，色谱柱为Dikma C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相:为氯仿-甲醇-2%二乙胺水溶液（80∶19∶1），检测波长：450 nm，流速：1 mL/min，柱温：45 ℃。结果 胆红素在一定色谱条件下能完全分离，在0.62～1.85 ?滋g/ml浓度范围内线形关系良好，线性回归方程Y=5 165 741X-61 229.freelg,批号10077-0201）；甲醇,氯仿和二乙胺均为色谱纯；水（超纯水），科室自制。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Dikma C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：氯仿-甲醇-2%二乙胺水溶液（80∶19∶1）2；检测波长：450 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：45 ℃。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取胆红素对照品约10.30 mg置100 mL棕色量瓶中，加氯仿80 mL，超声处理10 min，迅速放冷至室温，并用氯仿稀释至刻度摇匀，精密量取5 mL置50 mL棕色量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照液。 2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（1片量）置50 mL棕色量瓶中,加氯仿约50 mL超声处理10 min，速放冷至室温，并用氯仿稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液20 mL置50 mL棕色量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤过，作为供试品溶液。 2.2.3 阴性对照液 取除人工牛黄以外的其他三味药品按处方制备成缺人工牛黄样品，再按“2.2.2”项下制备，即得。 2.3 系统适用性试验 分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照液注入色谱仪，记录色谱图，从图1中可以看出，阴性对照色谱图在对应的胆红素位置处无干扰峰，即表明其它组分对测定无干扰。胆红素与其它组分峰的分离度都大于1.5。理论板数以胆红素峰计，不低于1 500。 2.4 标准曲线的制备 精密量取对照贮备液0.60、0.90、1.20、1.50、1.80 mL于10 mL棕色量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀。分别进样10 μL，记录色谱图，由峰面积（Y）(n=3)对相应的浓度（X）直线回归，胆红素回归方程为： Y=5 165 741X-61 229，γ=0.999 9 线性范围为0.62～1.85 μg/mL。 2.5 精密度考察 取同一对照品溶液进样6次， 10 μL，测定峰面积，计算RSD值为0.88%，结果表明仪器具有良好的精密度。 2.6 重复性试验 取同一批号的样品6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10 μL注入高效液相色谱仪器。测定峰面积,根据线性回归方程计算含量。结果其相对标准偏差RSD分别为0.95%（n=6）。 2.7 稳定性试验 取同一样品溶液，在0、2、4、6、8、10 h分别进样10 μL，依法测定，6次测定的胆红素峰面积RSD分别为1.1％，表明样品溶液在10 h内相对稳定。 2.8 回收率试验3 精密量取同一批(批号已知含量的供试品0.25 g平行6份置蒸发皿中（平均片重0.4915 g）， 分成3组，每组两份，分别加入对照品溶液0.8、1.0、1.2 mL（60.0 μg/mL胆红素氯仿溶液），将溶液蒸干，按“2.2.2”项下制备，摇匀，按“2.1”项下分别进样10 μL，记录色谱图，计算胆红素的回收率。结果见表1。 2.9 样品含量测定 将3批不同批号的磺碇冰黄片按“2.2.2”项下方法制备，进样10 μL，测定峰面积,按外标法计算含量。结果见表2。 3 结论 3.1 检测波长的选择 人工牛黄是磺碇冰黄片有效成分，具有解热、抗炎及抗感染作用，其中有效成分是胆红素、胆酸、去氧胆酸等。牛黄之贵贵在胆红素，因此选择其中的胆红素作为指标进行含量测定。胆红素易氧化，溶液颜色变绿，所以有关操作应尽量在避光条件下快速进行4。测定胆红素的紫外-可见光谱在450 nm有最大吸收波长，故选450 nm作HPLC法的检测波长。 3.2 流动相的选择 本实验比较了氯仿-乙腈-1%三乙胺溶液、氯仿-甲醇-1%三乙胺溶液、氯仿-甲醇-2%二乙胺水溶液等多种流动相系统，结果以氯仿-甲醇-2%二乙胺水溶液流动相峰形最好，分离最完全。 3.3 溶剂的选择 实验中曾比较过使用甲醇、乙腈、氯仿做溶剂，用甲醇和乙腈做溶剂时出现前沿峰对测定有干扰，使用氯仿柱效高，胆红素与其他组分色谱峰能很好分离。 【