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　　HPLC法测定腰痛片中芍药苷含量论文 【摘要】 目的 建立腰痛片中芍药苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，Shimpack VP-ODS C18(4.6 mm×150 mm,.freel）为色谱柱，甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相，检测波长为230 nm，流速为1.0 ml/min。结果 芍药苷线性范围为0.1448～2.8960 μg，平均回收率为100.4％，RSD为1.53％（n＝6）。结论 该方法操作简便，结果准确.freelpack VP-ODS C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)。 腰痛片（桂林三金药业股份有限公司，基片重0.35 g）；芍药苷对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供，批号为110736-200423）；甲醇、磷酸均为色谱纯（天津四友）；水为去离子纯化水；其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Shimpack VP-ODS C18(4.6 mm×150 mm,5 μm）；以甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相；流速为1.0 mL/min；检测波长为230 nm；进样量10 μL；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥36 h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得。 2.3 供试品溶液的制备 取本品10片，去糖衣，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为50%的甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率400 in，放冷，再称定重量，用体积分数为50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.4 阴性对照品溶液的制备 取处方组成中除赤芍外的其余成分，按“2.3”项处理，制成阴性对照品溶液。 2.5 专属性检查 吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μL注入色谱仪，测定。结果表明，阴性对照品在供试品相应的位置没有干扰。 2.6 线性及范围 精密称取芍药苷对照品3.62 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇制成0.724 mg/mL的贮备液。精密吸取上述贮备液配成一系列对照品溶液（0.01448、0.0362、0.0724、0.1448、0.2896 mg/mL），分别精密吸取10 μL注入液相色谱中，测定。以芍药苷质量（m）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，回归方程为：A＝11937m＋22.9，r＝0.9999。结果表明芍药苷进样量在0.1448～2.8960范围内线性关系良好。 2.7 精密度试验 精密吸取对照品溶液（0.0724 mg/mL）10 μL，重复进样6次，芍药苷峰面积RSD为1.82%。 图1 对照品（A）、样品（B）、阴性（C）HPLC图谱（a为芍药苷峰）（略） Fig. 1 HPLC chromatograms of control (A),sample(B) and negative control(C) 2.8 稳定性试验 分别于0，1，2，3，5，12，24，48 h精密吸取同一批号（批号供试品溶液10 μL，按“2.1”项下测定，结果芍药苷峰面积RSD为1.25%，表明供试品在48 h内稳定。 2.9 重复性试验 取同一批号腰痛片（批号6份，按“2.3”项下方法制备，并按“2.1”项色谱条件测定芍药苷的含量。结果芍药苷平均含量为3.57 mg/g，RSD为1.93%。 2.10 加样回收率试验 取本品（批号含量为3.57 mg/g）约0.3 g，精密称定，加入芍药苷溶液（1.0190 mg/mL）1 mL，按“ 2.3”项方法制备，分别测定，计算回收率，结果见表1。 2.11 样品含量测定 取3批腰痛片分别按“2.3”项方法制成供试品溶液，进样测定芍药苷含量，结果见表2。 表1 芍药苷加样回收率测定结果（n＝6）（略） Tab.1 Results of sample recovery test (n=6) 表2 腰痛片中芍药苷的含量测定结果（n＝3）（略） Tab.2 Results of paeoniflorin content in Yaotong tablets 3 讨论 3.1 在供试品溶液制备中，考虑到处方中含有药材细粉、树脂及挥发油等低极性的成分，参照2005年版药典中“赤芍”的方法，采用体积分数为50%的甲醇作为提取溶媒。 3.2 在流动性的选择上，参照2005年版药典中“赤芍”及“白芍”项，分别以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(体积比40∶65)、甲