HPLC法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量论文.docVIP

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HPLC法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量论文.doc

  HPLC法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量论文 .freelm×250 mm,5 μm),甲醇-水(70∶30)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm。结果 辣椒碱及二氢辣椒碱分别在1.955~7.820 μg(r=0.999 9)、2.709~7.224 μg(r=0.995 5)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率分别为101.57%、108.87%。结论 该法简便,结果准确、可靠,可用于测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量。 【关键词】 辣椒精;辣椒碱;二氢辣椒碱;高效液相色谱法;含量测定 Abstract:Objective To establish an HPLC method to determine the ted on C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm), ethanol-obile phase. The floL/min and the detection . Result The linear relationships of capsaicin and dihydrocapsaicin ethod is convenient,.freeline the content of tination 辣椒精为植物辣椒中经物理方法提练、精制而成,常用作镇痛、消炎、活血、冻伤、止痒、杀菌、戒毒、祛风湿、止痛、减肥。辣椒中的主要化学成分为辣椒碱和二氢辣椒碱,不同辣椒品种果实整体及不同部位中辣椒总碱的含量不同。为了建立辣椒有效成分质量控制标准,达到有效控制辣椒精质量的目的,本试验建立了高效液相色谱(HLPC)法测定辣椒精中主要成分辣椒碱及二氢辣椒碱的定量分析方法。该方法简便快速,分离度好,准确度高,可为辣椒精质量控制提供参考。 1 仪器与试药 LC-10AT vp plus高效液相色谱仪(日本岛津),SPD-10A vp plus检测器;AB265-s电子分析天平(METTLER瑞士);超声仪。 辣椒碱、二氢辣椒碱对照品由美国Sigma公司提供;辣椒精油溶液样品(河南倍特生物科技有限公司,批。甲醇为色谱纯,水为双蒸水(自制)。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱为C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(70∶30);流速为1.0 mL/min;柱温为25 ℃;检测波长为280 nm;进样量20 μL。在此条件下辣椒碱的保留时间为12.20 min,二氢辣椒碱的保留时间为16.52 min,能与其他成分很好分开。色谱图见图1。 注:1.辣椒碱;2.二氢辣椒碱;A.辣椒碱对照品;B.二氢辣椒碱对照品;C.供试品 图1辣椒精HPLC图谱 2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取辣椒碱和二氢辣椒碱粉末适量,分别置于10 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成约含0.200 0 g/L的辣椒碱和二氢辣椒碱的对照品溶液,低温避光保存备用。 2.3 供试品溶液的制备 精密称取辣椒精油样品0.03 g,置100 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,以0.45 μm微孔滤膜滤过,即得。 2.4 线性关系考察 分别精密吸取辣椒碱和二氢辣椒碱对照品溶液,分别进样10、15、20、25、30、35、40 μL,按上述色谱条件分析测定。以峰面积(A)为纵坐标,进样量(mg)为横坐标绘制工作曲线,得辣椒碱和二氢辣椒碱回归方程,分别为:Y=5.54×106X-3.7×104(r=0.999 9);Y=2.29×106X-3.3×105(r=0.995 5),线性范围分别为1.955~7.820 μg和2.709~7.224 μg。 2.5 精密度试验 分别吸取辣椒碱和二氢辣椒碱同一对照品溶液,重复进样6次,20 μL/次,测定其峰面积,计算其RSD分别为0.24%和0.92%,表明仪器精密度良好。 2.6 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液20 μL,分别于0、4、12、24、36、48 h进样分析,分别测定峰面积,计算其RSD,结果辣椒碱峰为0.92%,二氢辣椒碱峰为2.35%,表明样品溶液在48 h内稳定性良好。 2.7 重复性试验 精密称取6份辣椒精油样品0.03 g,按“2.3”项下方法制得供试品溶液,分别进样20 μL,分别计算样品中辣椒碱和二氢辣椒碱含量,结果其RSD分别为0.69%和0.72%。 2.8 加样回收率试验 精密称取10份已测知辣椒碱和二氢辣椒碱含量的辣椒精样品0.03 g,分为2组,分别准确加入辣椒碱0.02 mg和已知浓度的二氢辣椒碱对照品溶液,依法测定,并计算加样回收率,结果见表1、表2。表1辣椒碱加样回收率试验结果 表2二氢辣椒碱加样回收率试验结果

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