HPLC法测定菌毒清颗粒中丹酚酸B的含量论文.docVIP

　　HPLC法测定菌毒清颗粒中丹酚酸B的含量论文 范辉，宋粉云，钟兆健，肖若媚 【摘要】 目的 测定菌毒清颗粒中丹酚酸B的含量。方法 采用反相高效液相色谱法，Diamonsid TM C18柱，甲醇-乙腈-0.5%甲酸（体积比31∶10∶59）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长286 nm.freeline the content of Salvianolic acid B in Junduqing granules. Methods A RP-HPLC method atographic column onsil-C18. The mobile phase ethanol-acetonitrile -0.5%formic acid（31∶10∶59） The floL·min-1,.freel. Results The average recovery for salvianolic acid B ethod ethod can be used for quantitative determination of Junduqing granules. Key g，置50 mL棕色量瓶中，加体积分数为75%的甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取10 mL，置50 mL棕色量瓶中，用体积分数为75%的甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（浓度为40 μg·mL-1）。 2.1.2 供试品溶液的制备 精密称取菌毒清颗粒样品约4 g，置具塞锥型瓶中，精密加入体积分数为75%的甲醇25 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，称重，用体积分数为75%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。 2.1.3 阴性对照液的制备 取处方组成中除丹参外的其余成分制成不含丹参的阴性对照品，按“2.1.2”项下的制备方法处理得阴性对照液。 2.2 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱为 Diamonsil-C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司），甲醇-乙腈-0.5%甲酸（体积比31∶10∶59）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长286 nm，柱温为30 ℃。分别取对照品溶液（丹酚酸B浓度为12 μg·mL-1）、供试品溶液和阴性对照溶液10 μL注入色谱仪，理论板数以丹酚酸B计算应不低于5 000；丹酚酸B的拖尾因子为0.94，保留时间约为25 min，丹酚酸B与其他组分可基线分离；阴性样品不干扰样品测定（图1）。 1.丹酚酸B A.对照品 B.样品 C.阴性样品 图1 丹酚酸B对照品、样品及阴性的高效液相色谱图（略） Fig 1 HPLC chromatograms of salvianolic acid B (A) and sample (B) and negative (C) 2.3 方法学考察 2.3.1 标准曲线制备 分别吸取一定量的丹酚酸B对照品贮备液，加体积分数为75%的甲醇稀释成丹酚酸B浓度为2、4、8、12、16、20、24 μg·mL-1的溶液。依次进样10 μL，每个浓度测定3次以上。以峰面积（A）对对照品溶液质量浓度（ρ）进行回归，得丹酚酸B回归方程为A=9.85ρ-1.25，r＝0.9997。表明丹酚酸B质量浓度在2～24 μg·mL-1之间与峰面积线性关系良好。 2.3.2 精密度试验 取质量浓度为12 g·mL-1的丹酚酸B对照品溶液10 μL连续测定5次，其峰面积的平均值为115.9，RSD为1.97%，表明仪器精密度良好。 2.3.3 稳定性试验 取供试品溶液在0，2，4，6，8 h 分别进样10 μL，记录峰面积，结果4 h峰面积的RSD=2.79%，8 h峰面积的RSD=7.86%，表明供试品溶液在4 h内稳定，超过4 h不稳定，所以样品配制后应尽快测定。 2.3.4 重复性试验 取同一批号样品6份，照“2.1.2”方法处理并测定，结果丹酚酸B平均含量为0.076 mg·g-1，RSD为2.26%。表明分析方法精密度良好。 2.3.5 加样回收试验 精密称取同一批号样品共6份，精密加入丹酚酸B对照品贮备液3.8 mL，照“2.1.2”方法处理并测定，计算回收率，结果见表1。丹酚酸B平均回收率为101.5%，RSD=1.95%。结果表明本方法准确可靠。 表1 丹酚酸B回收率试验结果（略） Tab.1 Results of recovery test 平均回收率=101.5%, RSD=1.95% 2.4 样品测定 取菌毒清颗粒3批，照“2.1.2”方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液（12 μg·mL-1）