HPLC法测定辐花中獐牙菜苦苷的含量论文.docVIP

　　HPLC法测定辐花中獐牙菜苦苷的含量论文 .freelal C18(5 μm, 250 mm×4.6 mm),流动相为甲醇-水(水中含0.05%磷酸),梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长234 nm,柱温30 ℃。结果獐牙菜苦苷在3.10～30.98 μg范围内线性关系良好,相关系数为0.999 1；平均回收率为98.0%,RSD＝2.66%(n＝6)。结论 该方法操作简便,.freelethod for content determination of sarin in Lomatogoniopsis alpina. Methods HPLC method for determination atographic column： Alltimal C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm). Mobile phase： methanol-L/min. . Column temperture：30 ℃. Results The calibration curve of sarin ple and sensitive method in controlling the quality of Lomatogoniopsis alpina. Key atogoniopsis alpina；HPLC；sarin；determination 辐花来源于龙胆科辐花属植物Lomatogoniopsis alpina T.N.Ho et S.station色谱工作站),Sartorius BP211D分析天平。 药材采自四川省阿坝州金川县俄热,经华中科技大学同济医学院陈家春教授鉴定为龙胆科辐花属植物Lomatogoniopsis alpina T.N.Ho et S.滤膜滤过。 2 方法和结果 2.1 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱为Alltimal C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)。流动相为甲醇-水(水中含0.05%磷酸),梯度洗脱,0～25 min,甲醇由20%增至50%；25～35 min,甲醇由50%增至60%；流速1 mL/min。检测波长234 nm,柱温30 ℃。理论塔板数均 104,对称因子0.95～1.05。色谱图见图1。 2.2 供试品溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取对照品獐牙菜苦苷一定量,混合后用甲醇超声溶解并定容,制成浓度分别为1.549 mg/mL的溶液,经0.45 μm滤膜滤过,滤液作为对照品溶液。 2.2.2 样品溶液的制备 取辐花全草0.5 kg,置45 ℃烘箱干燥至恒重,粉碎,过80目筛,混合均匀后取约0.25 g,精密称定。用约8 mL甲醇浸泡过夜,超声提取2次,每次30 min,滤过。合并滤液,滤液水浴蒸干后用甲醇定容至10 mL,经0.45 μm滤膜滤过,滤液作为样品溶液。 2.3 方法学考察 2.3.1 线性关系考察试验 取上述对照品溶液,分别进样2、4、8、10、12、16、18、20 μL(n＝2),以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标进行回归计算,獐牙菜苦苷回归方程为：Y＝594.29X＋127.34,r＝0.999 1,进样量在3.10～30.98 μg范围内线性关系良好。 2.3.2 精密度试验 取对照品溶液,重复进样5次,每次10 μL,计算峰面积,RSD＝0.93%,结果表明精密度良好。 2.3.3 重复性试验 取同一批样品5份,按“2.2.2”项下方法制备样品溶液并测定含量,RSD＝0.48%,结果表明重复性良好。 2.3.4 稳定性试验 取同一样品溶液,在1 d内分别于0、2、4、8、12 h进样,计算峰面积,RSD＝0.45%,结果表明样品溶液在12 h内稳定。 2.3.5 加样回收试验 取已知含量的同一批贵州獐牙菜全草6份,精密称定,加入獐牙菜苦苷标准品适量,按“2.2.2”项下制备,计算回收率,结果见表1。表1 回收率试验结果(略) 2.4 样品测定 取不同产地的样品3批,按“2.2.2”项下方法制备样品溶液,以上述色谱条件测定,进样20 μL,测定峰面积,计算其含量,结果见表2。表2 样品含量测定结果(略) 3 讨论 试验考察了甲醇回流提取和超声提取等条件下的提取率,结果提示,回流提取时獐牙菜苦苷成分部分被破坏,故采用超声提取。超声提取时考察了药材粉碎度以及是否浸泡过夜的提取率,结果提示,过80目筛后用甲醇浸泡过夜,再超声提取2次,每次30 min,可提取完全。