VEGF在肺癌患者血清和病变组织中的表达及其与疾病预后的关系论文.docVIP

　　VEGF在肺癌患者血清和病变组织中的表达及其与疾病预后的关系论文 张祎捷,李现东,陈娜,韩继昌 李四红 【摘要】 目的：研究肺癌患者病变组织及血清中血管内皮生长因子（VEGF)的表达及其与肺癌生物学特性之间的关系. 方法：酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫组化（SP法）分别检测不同考察因素的肺癌患者和肺炎性瘤样病变患者血清中及肺癌患者癌组织、癌旁组织和肺炎性瘤样病变患者中病变组织中VEGF的表达. 结果：血清VEGF的表达肺癌患者为（330±65） ng/L，明显高于肺炎性瘤变患者的（143±35） ng/L (P 0.05)；癌组织、癌旁组织及肺炎性瘤样病变组织中VEGF的表达率为74.8%，46.3%和18.1%，癌组织中表达率明显高于其余两者 (P 0.05)；肺癌患者VEGF的表达与年龄、性别、吸烟史和不同临床分期差异均无统计学意义(P 0.05)，而与癌组织类型、分化程度和淋巴结转移差异具有统计学意义(P 0.05). 结论：VEGF在肺癌组织及肺癌患者血清中异常表达，与肺癌患者病变组织的病理类型、分化程度和淋巴结转移呈明显相关性，与肺癌患者的预后有关，VEGF表达变化可能成为一些类型肺癌新的诊断标志及基因治疗的新靶点. 【关键词】 肺肿瘤；血清；血管内皮生长因子；预后 0引言 血管内皮生长因子（vascular endothelial groAb即用型SP试剂盒（福州迈新公司）；血清检测ELISA试剂盒（美国G.B公司）. 1.2方法 1.2.1标本采集所有患者于治疗前空腹抽取静脉血2 mL（不含抗凝剂），静置后，取血清用于VEGF的检测. 1.2.2免疫组化染色将待检测标本统一切成4 μm厚石蜡切片，提取组织细胞，按试剂盒说明进行免疫组织化学（SP法）染色. 步骤如下：石蜡切片（载玻片经APES胶处理）60℃烤片4 h. 切片按常规脱蜡至水. 3 g/L过氧化氢去除内源性过氧化物酶，10 min，水洗. 40 g/L胃蛋白酶30℃~32℃消化10 min，水洗. 0.01 mmol/L柠檬酸缓冲液内加热至90℃后，计时10 min，室温下自然冷却. 0.05 mmol/L Tris缓冲液2 min×3次，滴加正常鼠血清20 min，滴加兔抗AR mAb（浓度为1∶50）4℃过夜；0.05 mmol/L Tris缓冲液2 min×3次，滴加生物素化羊抗鼠IgG（浓度为1∶200）室温下30 min；0.05 mmol/L Tris缓冲液2 min×3次，滴加Streptperoxidase（浓度为1∶200）室温下40 min，DAB显色，镜下控制. 苏木素复染细胞核、脱水、透明、封片并照相. 阳性染色为肿瘤细胞浆内出现棕色颗粒. 组织VEGF表达结果判定标准：染色强度：0=未染色，1=弱染色，2=中等染色，3=强染色. 细胞染色百分率：0为0%阳性细胞，1为 25%阳性细胞，2为25%～50%阳性细胞，3为 50%阳性细胞. 采用染色强度+细胞染色百分率为记分方法，标准：0分为(-)，1～2分为(+)，3～4分为()，5～6分为(). 表达程度的划分界限：(-), (+)为阴性表达，(), ()为阳性表达. 1.2.3ELISA检测按试剂盒步骤进行. 将抗人VEGF mAb包被于酶标板上，然后加样使标准品或样品中的VEGF与mAb结合，随后加入生物素化的抗人VEGF，在酶标板上形成免疫复合物，最后加入辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合并加入酶底物邻苯二胺（OPD）进行显色. 采用Labsystem全自动酶标仪测A450 nm值. 根据标准品不同浓度及所读取A450 nm值，取双对数得直线回归方程并符合说明书要求，依直线回归方程求出样品VEGF浓度. 结果直接用浓度值（ng/L）高低表示. 上述两个检测内容的所有标本均同时做三个复样检测，取其算术平均值作为一次的结果，重复操作3次. 统计学处理：结果采用SPSS 11.5统计软件进行统计分析. 两样本比较采用χ2检验，计量资料以x±s表示，用组内两样本之间的t检验或近似t检验. P 0.05为差异具有统计学意义. A: VEGF在肺癌组织中的表达; B: VEGF在癌旁组织中的表达; C: VEGF在肺炎性瘤样病变患者肺组织中的表达. 图1免疫组化检测 2结果 2.1VEGF在肺癌组织及细胞中的表达肺癌组织和细胞中VEGF表达阳性率为（75.6±2.4）%（表达呈强阳性），明显高于癌旁组织和细胞（43.2±2.1）%（表达阳性者呈中度阳性）( P 0.05)，也明显高于炎性瘤样病变组织和细胞（15.7±1.8）%（表达阳性者为弱阳性）( P 0.05)，而在癌旁组织和细胞中VEGF表达量明显高于炎性瘤样