小桐子磷脂二酰甘油酰基转移酶(JcPDAT1) cDNA的克隆与功能鉴定.pdfVIP

中国油料作物学报 ２０１３，３５（２）：１２３－１３０ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ ｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１３．０２．００３ 小桐子磷脂二酰甘油酰基转移酶（ＪｃＰＤＡＴ１） ｃＤＮＡ的克隆与功能鉴定 １ １，２ １，２ １ １ １ 徐荣华 ，邱丽俊 ，阳天泉 ，王如玲 ，田　波 ，刘爱忠 （１．中国科学院西双版纳热带植物园，热带植物资源开放实验室，云南 昆明，６５０２２３；２．中国科学院研究生院，北京，１０００４９） 　　摘要：使用简并ＰＣＲ结合ＲＡＣＥ技术从能源植物小桐子种子中克隆了一个ＰＤＡＴ基因的ｃＤＮＡ全长，命名为 ＪｃＰＤＡＴ１（ＧｅｎＢａｎｋ登陆号为ＨＱ８２７７９６）。ＪｃＰＤＡＴ１全长２８６９ｂｐ，包含一个长为２０１３ｂｐ的开放阅读框，编码６７０ 个氨基酸。多序列比对和进化分析表明该基因编码蛋白与其他植物ＰＤＡＴ高度同源，具有典型的ＰＤＡＴ结构域。 ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ结果表明ＪｃＰＤＡＴ１在种子、叶和根里面都有表达，且在种子发育过程中大量表达。酵母互补实验证 实该基因编码蛋白具有ＰＤＡＴ酶活性。在与酿酒酵母突变体Ｈ１２４６ 的互补实验中发现，ＴＬＣ层析（薄层层析法） α 和尼罗红染色结果都显示ＪｃＰＤＡＴ１的表达使Ｈ１２４６ 恢复合成ＴＡＧ，说明ＪｃＰＤＡＴ１具有ＰＤＡＴ的功能活性。 α 关键词：小桐子；ＰＤＡＴ；简并ＰＣＲ；基因克隆；荧光定量ＰＣＲ；酵母互补实验 中图分类号：Ｑ７８６，Ｓ５６５．９０３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１３）０２－０１２３－０８ Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇｏｆｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ：ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＪｃＰＤＡＴ１）ｃＤＮＡｆｒｏｍＪａｔｒｏｐｈａｃｕｒｃａｓ １ １，２ １，２ １ １ １ ＸＵＲｏｎｇ－ｈｕａ，ＱＩＵＬｉ－ｊｕｎ ，ＹＡＮＧＴｉａｎ－ｑｕａｎ ，ＷＡＮＧＲｕ－ｌｉｎｇ，ＴＩＡＮＢｏ，ＬＩＵＡｉ－ｚｈｏｎｇ （１．ＸｉｓｈｕａｎｇｂａｎｎａＴｒｏｐｉｃａｌＢｏｔａｎｉｃａｌＧａｒｄｅｎ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０２２３，Ｃｈｉｎａ； ２．ＧｒａｄｕａｔｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００４９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｃｏｎｓｅｒｖｅｄｒｅｇｉｏｎｏｆＰＤＡＴｇｅｎｅａｖａｉｌａｂｌｅｆｒｏｍＧｅｎＢａｎｋ，ｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆ ＰＤＡＴｇｅｎｅｆｒｏｍＪａｔｒｏｐｈａｃｕｒｃａｓＬ．ｗａｓｃｌｏｎｅｄｂｙｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅＰＣＲａｎｄＲＡＣＥ．ＴｈｅｇｅｎｅｗａｓｎａｍｅｄＪｃＰＤＡＴ１ （ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＨＱ８２７７９６）．ＴｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｏｆＪｃＰＤＡＴ１ｗａｓ２８６９ｂｐ，ｅｎｃｏｄｉｎｇ６７０ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．Ｓｅ ｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔＪｃＰＤＡＴ１ｓｈａｒｅｄｈｉｇｈｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈＰＤＡＴｆｒｏｍｏｔｈｅｒ ｐｌａｎｔｓ，ｓｕｃｈａｓＲｃＰＤＡＴ１（Ｒｉｃｉｎｕｓｃｏｍｍｕｎｉｓ，７５％）ａｎｄＡｔＰＤＡＴ１（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ，７４％）．Ｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅ ｈａｒｂｏｒｅｄｔｙｐｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｏｍａｉｎｓｏｆＰＤＡＴ．ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣ