中药体外抗PRRSV的筛选及联合重组PoIFNγ抗PRRSV的研究.pdfVIP

中药体外抗PRRSV的筛选及联合重组 PoIFN—Y抗PRRSV的研究 ● ¨ 梅春升1 周世霞2 马立保“ (1华中农业大学动物营养与饲料科学系武汉430070； 2浙江欣欣饲料股份有限公司 嘉兴314005) 根、野菊花、穿·o莲、黄芪、叠银花、鱼腥草、柴胡、黄连、连翘、甘草、黄萃和紫花地丁，共12味中 28mg／ml；甘草15 ml；连翘7．8lmg／m1．1 50 丁31．25mg／ml，2．47mg／ml。重组POIFN一的Ic蚰为99u／ml。12昧中药中治疗指数住于前三位的是 黄芪、黄萃和板蓝根，其T1分别为70．22，56．47和4466。综合评价中药抗PRRsV数果和开发价值，选 协同作用。 关键词猪干扰素中药联合用药PRRsv 随着养猪业的不断发展，猪病也越趋复杂化、混合化，使得猪病的防治难度越来越大。干扰素是 一种高活性、多功能的生物活性蛋白，具有强烈的免疫调节作用，可用于预防和治疗多种动物病毒性 疾病，无论对病毒、细菌、立克次氏体、衣原体、原虫均有一定的抑制作用。但某些病毒性疾病用西 药依然无法得到有效控制，中药的防治作用越来越受到人们的关注。 为了能取得较好的治疗效果，多药联用或序贯用药又是现代临床医学的主导趋势(Befen． hum，1989)。采用联合用药的目的，在于同时使用几种不同抗病毒机制的药物．使其作用于病毒 增殖周期的不同阶段，取得协同抗病毒的目的，联合用药还有防止病毒抗药突变株出现的作用。 几种药物同时使用，除了拮抗之外，无论是相加还是协同，均可减少各种药物的用量，降低昂贵 药物的成本．降低毒副作用，还可以防止或延缓病毒抗药突变株的出现。吕海涛等(2000)研究 了双黄连对rIFN一2a抗柯萨奇病毒的影响，结果表明，两药联用抗柯萨奇病毒呈明显协同作用， 2．58倍左右。 ·梅春升(1982一)。男，在读硬士，E—mail：毗胡20208@础m且iL血e札cⅡ。 ¨通讯作者．马立保(1965一)，男，副教授，研究方向：单胃动物营养．E—mail：瞰bb柏@126．啪。 ·450． 分子营莽与新技术研冤 l材料与方法 1．1材料 1_1_1药物 板蓝根、野菊花、穿心莲、黄芪、金银花、鱼腥草、柴胡、黄连、连翘、甘草、黄芩和紫花地 统测得抗病毒效价约为1．3×103u／lIll，浓缩配制成效价为l000u／lIll的溶液备用。 1．1．2病毒与细胞 兽医专业病毒室惠赠。 1．1_3主要试剂与仪器 胰蛋白酶为sigma公司产品。 酶标仪E1)【800型；50mm0．22“m的微孔滤膜(上海半岛实业有限公司净化滤器厂)；96孔细 胞培养板(美国costar公司)。 1．2方法 1．2．1中药提取液制备 分别称取板蓝根、野菊花、穿心莲、黄芪、金银花、鱼腥草、柴胡、黄连、连翘、甘草、黄芩和 紫花地丁各10 g于大锥形瓶中，用传统的煎煮法提取药液，蒸馏浓缩成含生药量500mg／Ⅱll，依次用 滤纸和微孔滤膜抽滤，调PH值到7．o，高压灭菌，4℃冰箱保存备用。临用时用细胞维持液稀释。 1．2．2细胞培养 于试验。 1．2．3病毒的增殖及TcID。的测定 2％小牛血清的DMEM营养液继续培养，当细胞病变达到75％以上时收毒，反复冻融数次，分装后 一70℃冻存备用。据Reed—Muench公式计算TClD50(阴天榜，1999)。 l_2．4药物对Marc一145细胞的毒性试验 一，每个稀释度加3孔，同时设细胞对照，37℃、5％co：培养箱内培养96h，每天用倒置显微镜观 察并记录细胞cPE，96 度(Tc。)，并计算细胞存活率(薛开莲等，2007)。 细胞存活率c％，=嘉韶筹煮暑黼×too％ 度1℃∞。 l’2．5单一药物抑制PRRsV增殖试验 试验在96孔板上进行，待细胞长成单层后，吸掉营养液，用Hmks’液冲洗细胞一