气相色谱法对断奶腹泻兔与健康兔肠道菌群比较研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物徽生态学分会第三届第八次学术研讨会论文集 (2006年广州) 气相色谱法对断奶腹泻兔与健康兔肠道菌群比较研究· 柴同杰 ”刘辉2晋爱兰3段会勇， (1.山东农业大学动科院，泰安，271018;2.山东农科院家禽所;3.山东省菏泽学院动科系) 摘要:选用普通营养琼脂、血琼脂和多种选择性培养基对32一54日龄健康断奶幼兔和腹泻幼兔肠道 中需氧菌和厌氧菌进行分离、、培养和计数，并采用气相色谱法鉴定肠道厌氧菌.对比研究腹泻和健 康断奶幼兔的各段肠管的需氧菌和厌氧菌含量发现，腹泻兔厌氧菌总数仅为健康兔的40.76%，而需 氧菌总数腹泻兔比健康兔增加了72.31倍 (P0.01)，肠杆菌增加了112.20倍 (P0.01),葡萄球菌 和酵母菌有轻度升高 (P0.05);分别比较腹泻幼兔与健康幼兔每段肠管中的需氧菌总数、肠杆菌、 葡萄球菌和酵母菌含量发现，腹泻兔十二指肠、回肠和直肠含量明显升高(P0.05)，其他三段肠管 的差异不显著 (P0.05).在厌氧菌中，腹泻兔与健康兔相比，类杆菌含量下降(P0.0I)，消化球 菌、消化链球菌和韦荣氏球菌含量下降(P0.05);双歧杆菌、乳酸杆菌、梭杆菌、梭菌含量有所升 高 (P0.05)，而肠球菌、优杆菌、棒状杆菌和弯曲杆菌的含量轻度下降 (P0.05).将各段肠管中 的各种厌氧菌含量进行比较，发现盲肠中的厌氧菌含量差异极显著 (P0.01)，回肠差异显著 (P0.05)，其它四段肠管 (十二指肠、空肠、结肠、直肠)中厌氧菌含量差异不显著 (P0.05). 关键词:断奶幼兔;肠道菌群;气相色谱法鉴定厌氧菌 随着集约化规模化养兔业的发展，家兔疫病流行变得复杂，动物保健和疫病控制任务越来越艰 巨。家兔腹泻征在许多兔场已经成为一种顽症，尤其在断奶后3周之内，即30-50日龄前后，生长 兔的发病率高达87%以上，兔腹泻己经成为影响兔业生产的主要疾病。据对有关兔场疫情统计，在 一个平均为24%死亡率的兔群中，74%以上系腹泻病所致。种幼兔断奶后在用抗生素预防的情况下， 腹泻发病率仍达29^87%，死亡率在80-100%之间;商品幼兔发病率超过35-90%，死亡率超过 90%以上，给养殖业造成了很大的经济损失。断奶幼兔腹泻造成死亡，严重阻碍了养兔业的发展， 是亚待解决的问题.本课题就是针对兔业生产中危害严重的断奶幼兔腹泻症问题，对比分析断奶健 康与腹泻幼兔肠道菌群变化规律及不同肠管中需、厌氧菌之间的含最关系，找到幼兔腹泻的菌群失 调的规律和原因，从而为有效地预防和治疗家兔腹泻病提供理论依据。 1材料与方法 1.1样品来集 将健康和断奶腹泻病兔或死亡兔从兔场 (山东省潍坊绿洲兔业公司)取回，在实验室 进行解剖和细菌分离、培养和鉴定。 1.2样品处理 实验时，将断奶幼兔按要求处死，立即剖腹，无菌操作，结扎取出全段胃肠道，(分别 在厌氧和需氧环境下对肠内容物处理)。分别从十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠中采集肠内 容物各0.5g，放于盛有4.5m1厌氧菌缓冲液的无菌小瓶中，盖好橡胶盖，充分混匀，作为第一稀释度 (10-1)，然后依次十倍稀释，至10一 选择合适的稀释度，分别吸取0.05m【滴种于各种培养基上. 每个培养基平板滴三个稀释度，每个稀释度滴3滴，每一样本重复滴种三次，结果取其平均值。 1.3培养基的选择选用普通营养琼脂和EG琼脂用于需氧菌和厌氧菌总数的分离、计数，选用麦康凯 培养基、甘露醇高盐培养基、沙堡弱培养基和BLb,LBs.PS.SC,EC,FS,Bds,ES,TTC和CD 等选择性培养基】分别用于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等需氧菌和双歧杆菌、乳酸杆菌、消化 球菌、消化链球菌、肠球菌、梭杆菌、类杆菌、优杆菌、弯曲杆菌和梭菌等厌氧菌的分离、计数二 1.4细菌培养、计数及选择性培养基的选择性能将接种好的培养基立即放入培养箱中进行培养，其 中普通培养基、麦康凯培养基、甘露醇高盐培养基和沙堡弱培养基进行需氧培养，培养温度371C. 将其余培养基放入厌氧培养箱中(气体成分:78%N2,5%H2,7%CO2),37℃培养24-120h后，按 舞者:柴同杰，(1957-)，山东德州人，教授，博士生导师，从事兽医微生物学、免疚和传染病学的教学科研工作，Email: chaitj@sdau.edu.cn. 资助项目:2001山东省重点攻关项目(012010116),“集约化养兔腹泻病因学研究” 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第八次学术研讨会论文集 (2006年广州) 照菌落可数性原则，选择