肺癌相关抗原的筛选及鉴定.pdfVIP

郑州大学2007年硕上论文 中文摘要 1．将肺癌cDNA表达文库铺板，转膜，异丙基．B．D．硫代半乳糖苷(IPTG) 诱导蛋白质表达，3％脱脂奶粉封闭，同1：100稀释的预吸收血清反应后，与1： 5000稀释的二抗反应，在二氨联苯胺(DAB)的作用下显色，抗原抗体复合物处 呈现紫蓝色。重复铺板和筛选3次，直到获得阳性重组噬菌体。 2．挑取阳性噬菌斑，噬菌斑块于SM缓冲液中4℃保存。阳性克隆经过体内 SK．噬菌粒。 剪切，成为pBluescript I、EcoR 3．提取质粒，Xho I双酶切初步鉴定插入片段的大小。 行同源性比对分析。 二、筛选出的肺癌抗原的初步血清反应分析 1．将第三轮筛选获得的阳性重组噬菌体铺板，转膜，IPTG诱导蛋白质表达， 3％脱脂奶粉封闭，分剪成大小为lcmx2cm的100份，分别与50例肺癌患者、 50例正常人预吸收血清反应后，与l：5000稀释的二抗反应，在二氨联苯胺(DAB) 的作用下显色，抗原抗体复合物处呈现紫蓝色。 ， 2．统计学处理：比较每个克隆在肺癌病例和正常血清的阳性率，肺癌病例 的阳性率高于正常血清的是阳性反应克隆。将筛选到的阳性反应克隆进行联合检 测，测定其灵敏度和特异度。所有数据采用SPSSll．0软件包处理，统计学分析 采用f检验、四格表的确切概率法。 结果 1．经过三轮筛选，从5x105pfu／ml的文库筛得70个阳性克隆，其插入片段 括26个功能未知的基因，2个可能的新基因，35个功能已知的基因。在已知功 能的基因中，有1个基因与肺癌的发生、发展关系密切；34个基因报道与细胞 的分化、代谢及信号转导等有关系，与其它肿瘤的发生、发展有关。 2．在35个功能已知的基因中选择5个肺癌候选抗原基因，用50例肺癌患 者和50例正常人血清对它们介导的IgG免疫反应进行检测、分析，得到3个阳 性反应的肺癌相关抗原克隆。 3．把这3个阳性反应抗原克隆联合起来分析，发现同时进行检测时能够在保 II 郑州大学2007年硕十论文 中文摘要 持特异度等基本不变的前提下，明显提高诊断的灵敏度，具有较大的临床诊断价 值。 结论 本研究鉴定出的肺癌相关抗原及进一步的血清学分析，有助于进一步阐述肺 癌的发生机制，为肺癌的早期诊断、联合检测及免疫治疗提供候选标志物，也为 肺癌的早期诊断提供了一个新的方向。 关键词 肺癌；肿瘤相关抗原；SEREX；eDNA表达文库筛选；生物信息学分析；血 清学 IJl 郑州大学2007年硕t论文 英文摘要 The andidentificationoftumorassociated screening in cancer antigens lung Postgraduate：WangPeng Supervisor：Prof．ZhangJianying Member ofDirector：Prof．WangKaijuan AssociateProf．Dai Liping ofPublic College Healt