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结果判读 直接抗球蛋白试验 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管凝集，判定为阳性 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管不凝集，需要做阴性确认后判定结果（无凝集的被检管中加入IgG抗-D致敏红细胞后离心，出现凝集判阴性，否则重新试验 阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，结果不可信不发报告，分析原因重做 阳性对照管呈现凝集反应，阴性对照管未呈现凝集反应，被检管呈现凝集反应为阳性结果，被检者血清内含有抗体，如果自身对照无凝集，同种抗体；如果被检者结果阴性，被检者血清中未被查出意外抗体。 阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管出现凝集，实验失败。 结果判读 抗球蛋白试剂不纯 假阳性 假阴性 红细胞洗涤已凝集 红细胞质量 不抗凝标本 漏加试剂 离心过度 红细胞、血清及试剂质量 洗涤不充分 操作过程不连续 离心过度 红细胞过多或过少 血清浓度过大 孵育时间和温度不当 前带现象 间接抗球蛋白试验 盐水保存不当 红细胞直抗阳性 抗球蛋白试验的影响因素 抗体亲和力 孵育时间和温度：IgG抗体、补体致敏37℃，30∽60min 离子强度 抗原抗体比例 洗涤 体外补体致敏 红细胞自身凝集 第五节 聚凝胺介质试验技术 聚凝胺介质试验技术 是一种快速、简便、红细胞不完全抗体的方法 多数IgG抗体能够被检出，但IgG抗-K抗体除外 汉族至今未发现K抗原阳性，也未检出抗-K抗体 红细胞抗原抗体反应过程 抗原抗体的靠近： 红细胞抗原位点带负电荷，抗体Fab端带正电（Kell系统抗原带正电荷） 抗原抗体的结合： 静电引力、氢键、疏水键及范德华力 影响红细胞抗原抗体反应的因素 离子强度： 反应液中的电解质会增加溶液的介电常数，减弱抗原抗体间的静电作用 降低离子强度可以显著增加抗原抗体结合速率。如:离子强度由0.17M降到0.03M时，抗D和D阳性红细胞的开始结合速率增加1000倍。 红细胞表面电荷及其相互之间的距离 １.低离子强度作用原理 当溶液中缺少离子时，抗原抗体之间的静电作用力强 当溶液中离子增多时，抗原抗体之间的静电作用力弱 抗原 非离子 静电作用力 抗体 静电作用力 离子 抗原 抗体 ２.低离子聚凝胺交叉配血技术 原理：聚凝胺（Polybrene），一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果使抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。 1 红细胞间有一定间距 2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集 3 加入枸橼酸钠，可以中和聚凝胺 4 红细胞的非特异性凝集消失 聚凝胺交叉配血技术示意图1 聚凝胺 枸橼酸钠 1 红细胞上已有不完全抗体致敏 2 加入聚凝胺后，缩短红细胞之间的距离，让不完全抗体可以同时与两个红细胞结合使其特异性凝集 3 加入枸橼酸钠中和聚凝胺 4 由于不完全抗体的结合，红细胞的特异性凝集不消失 聚凝胺交叉配血技术示意图2 聚凝胺 枸橼酸钠 不完全抗体 注意事项 不能使用含枸橼酸钠和肝素抗凝标本 按比例加样，非特异凝集60秒内观察结果 出现不配合试验时，抗球蛋白重复，结果不一致时以抗球蛋白试验结果为准 一般使用血清 对Kell系统检测不理想 按照说明书 聚凝胺方法的特点 灵敏：灵敏度高 速度快：实验时间5分钟左右 准确：准确度高于酶试验 不适合于Kell系统抗体的检测，但黄种人群中Kell系统抗体极罕见 操作要求较高 第六节微柱凝胶实验技术 ???? 凝胶技术的原理 ? 反应室 外管壁 反应室底孔 内套管壁 凝胶或 玻璃珠 亲和凝胶 试剂或 盐水 特殊粘液 凝胶技术的原理： A、反应室：下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。 B、试剂或盐水层：红细胞在离心力作用下穿越该层，红细胞与反应室中的血清分离并与该层液体中的试剂反应。 C、粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层”相同。 原理：凝胶分子筛和亲和效应 微柱凝胶柱中填充凝胶（葡聚糖），及相应试剂（抗体或抗原）。凝胶分子间的间隙只允许游离红细胞通过，分子排阻层析原则将发生凝集反应的红细胞阻滞于凝胶之内，而未凝集的游离红细胞则穿过微孔运动到管底，从而判定有无凝集反应。 结果判定 新乡医学院第三临床检验教研室 结果判定 简便 准确 敏感：在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。 结果可保存 凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。 操作技术要求较低：凝胶试验的操作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过程都有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。 无需洗涤的抗人球蛋白试验 优点： 第七节 吸收放散试验 乙醚放散法 试 验 原