动物病毒学实验技术-培训课件.pptVIP

待检血清及阴性血清的稀释 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 稀释液（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 血清量（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 稀释倍数 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 ↘ 3、病毒-血清混合液：将病毒液0.5ml（ 200TCID50/20μl）与不同的待检血清和阴性血清0.5ml分别混合，在37℃水浴中作用1h。 4、接种细胞培养：将长成单层的细胞培养板倾去营养液，用Hanks液洗一次，接种病毒血清混合液20μl（含病毒100TCID50），每一稀释度混合液接种4孔37℃吸附1h，补加维持液培养，每日检查CPE。当阴性血清的各管出现CPE时，既可读取结果。 5、抗体滴度的计算：待检血清中和抗体滴度一般以抑制50%细胞培养孔的血清最高稀释度表示可按Reed-Muench法计算 固定病毒稀释血清中和试验计算方法 稀释度 死亡比 死 活 累计 保护率 死 活 死亡比 1:4(10-0.6) 0/4 0 4 0 9 0/9 100% 1:16(10-1.2) 1/4 1 3 1 5 1/6 83% 1:64