蛋白质和蛋白质药物2.pptVIP

第四节 蛋白质结构与功能的关系 蛋白质的性质 一、蛋白质的两性解离和等电点 蛋白质与多肽一样，能够发生两性离解，也有等电点。在等电点时，蛋白质的溶解度最小，在电场中不移动。 在电场中，如果蛋白质分子所带正电荷多于负电荷，净电荷为正，则向负电极移动，反之，净电荷为负，向正极移动，这种泳动现象称电泳。 蛋白质在等电点PH条件下，不发生电泳现象，利用蛋白质的电泳现象，可以将蛋白质进行分离纯化。 二、蛋白质的胶体性质 这是蛋白质特有的性质。 由于蛋白质的分子量很大，它在水中能够形成胶体溶液。蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质，如丁达尔现象、布郎运动等。 由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去 三、蛋白质的沉淀作用 蛋白质胶体溶液的稳定性与它的分子量大小、所带的电荷和水化作用有关。 改变溶液的条件，将影响蛋白质的溶解性质 在适当的条件下，蛋白质能够从溶液中沉淀出来。 蛋白质的沉淀分为可逆沉淀和不可逆沉淀。 沉淀蛋白质的方法 (1)盐析:加入电解质，使蛋白质发生沉淀的现象. 实质：破坏蛋白质分子的水化膜和中和其所带的电荷。 盐析浓度:盐析时所需电解质的最小浓度. 常用盐析电解质: (NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl 分段盐析:利用不同蛋白质盐析浓度不同分分离蛋白质的方法 特点：盐析法沉淀的蛋白质没有变性，去盐后活性恢复。 沉淀蛋白质的方法 (2)有机溶剂沉淀:加入极性有机溶剂，使蛋白质发生沉淀的现象. 实质：破坏蛋白质水化膜。 特点：低浓度、低温、短时间蛋白质不变质. (3)重金属盐沉淀: pHpI时 沉淀蛋白质的方法 (4)生物碱试剂沉淀: pHpI时 1、可逆沉淀 在温和条件下，通过改变溶液的pH或电荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。 在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。 可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等。 2、不可逆沉淀 在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水。 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。 如加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉淀和生物碱沉淀等都属于不可逆沉淀。 四、蛋白质的变性 天然蛋白质因受物理或化学因素的影响，分子构象发生变化，致使蛋白质的理化性质和生物学功能随之发生变化，但一级结构未遭破坏，这种现象称为变性作用。 变性后的蛋白质称为变性蛋白。 导致蛋白质变性的因素：热、紫外光、激烈的搅拌以及强酸和强碱等。 类型：不可逆变性、可逆变性（可复性） * * 欢 迎 一、蛋白质的一级结构与功能的关系 蛋白质一级结构是空间结构的基础：蛋白质的一级结构决定蛋白质空间结构，蛋白质的空间结构又决定蛋白质的生物学功能功能。 核糖核酸酶 Anfinsen经典实验 变性 复性 蛋白质是由氨基酸组成的大分子化合物，其理化性质 一、蛋白质的理化性质 第五节 蛋白质的理化性质及其分离纯化 一部分与氨基酸相似，如两性电离、等电点、呈色反应等。 也有一部分又不同于氨基酸，如高分子量、胶体性质、变性等。 蛋白质的两性电离及等电点 蛋白质的等电点（pI） (5)蛋白质互相沉淀:抗体— 抗原反应 蛋白质的变性 天然蛋白质在某些物理、化学因素的作用下，丧失其生物活性，改变其理化性质的现象。 物理因素：加热、高压、搅拌、X-射线、紫外线、超声波 化学因素：强酸、强碱、脲、重金属盐、有机溶剂、生物碱等 实质：破坏副键，改变其构象 *