注射用重组双功能水蛭素产品质量研究论文.docVIP

　　注射用重组双功能水蛭素产品质量研究论文 .freelid，HD-pPIC9K，ented for 3 days，and the purified RGD-Hirudin easured up to standard of injection. 天然水蛭素是凝血酶的特异抑制剂，从医用水蛭的唾液腺中提取而得，可与凝血酶形成摩尔比为1:1的非共价相结合的可逆复合物，对凝血酶有很高的亲和力，使凝血酶失去裂解纤维蛋白原的能力，抑制纤维蛋白的形成，因此，低浓度的水蛭素可有效地抑制血液凝固［1］。 我们在保留天然水蛭素原有的生物学作用的基础上，将 RGD 编码顺序融合在天然水蛭素 cDNA 基因中［2～5］。构建了含RGD编码顺序的水蛭素cDNA克隆HD-pPIC9K，表达质粒转化毕赤酵母后，经筛选获得高表达菌株，并建立工程菌株，实现了高效、分泌型表达 (另文发表)。 本文重点报道重组双功能水蛭素原液的质量研究。 1 材料与方法 1.1 抗凝比活性测定 1.1.1 试剂的配制 0.5%纤维蛋白原：纤维蛋白原(上海莱士血制品有限公司)0.5g，以100ml生理盐水溶解。凝血酶：中国生物制品检定所制备的凝血酶，依照标示量，用生理盐水复溶后成100NIU/ml。阴性对照：以生理盐水为样品，凝血酶加入后立即凝固。标准对照：德国 Hochest 公司生产的 Refludan，