基因定点突变试剂盒详解.PDF

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology   订货热线：400-168-3301 或 800-8283301 订货 e-mail ：order@ 技术咨询：info@ 碧云天网站 微信公众号 网址： 基因定点突变试剂盒 产品编号 产品名称 包装 D0206 基因定点突变试剂盒 10次 产品简介：  碧云天生产的基因定点突变试剂盒(Site-directed Gene Mutagenesis Kit)可以 用于点突变，多个邻近密码子的突变，单个或多个邻近密码子的缺失 (deletion)或插入(insertion)突变。  本试剂盒是一个利用目前最新的基因点突变技术设计而成的试剂盒。只需通 过基于PCR 的突变质粒的合成，和基于DpnI 的模板质粒的消化，转化培养以 及后续的酶切或测序鉴定，即可得到预期的突变质粒(参考图1)。累计操作时 间不足2小时即可完成基因的定点突变。  本试剂盒在原来使用高保真酶Pfu DNA Polymerase 的基础上，使用了最新的 保真性更高，扩增效率更高的BeyoFusion™ DNA Polymerase ，进一步提高了 基因定点突变的成功率。同时进一步严格验证了试剂盒中的DpnI ，确保能充 分消化掉甲基化的模板质粒，同时不会消化为甲基化的PCR产物。  参考图1，使用本试剂盒时需要先设计长度通常为30个碱基以上的互补的两 个引物，在引物中含有预期的突变位点。然后以待突变的质粒为模板，用这 两个引物进行PCR扩增反应。这样可以产生含有预期的突变位点的双链质 粒，但这个双链质粒中有两个nick位点。待突变的质粒通常来源于DH5α等 dam+ + 大肠杆菌，在这些dam 细菌中质粒会被甲基化修饰，而在体外通过PCR 扩增得到的质粒不会被甲基化。这样用特异性识别甲基化位点的酶DpnI处 理，可以消化掉待突变的质粒模板，而使通过PCR扩增出来的含有突变位点 的质粒被选择性地保留下来。随后把DpnI处理过的产物转化感受态细菌后， 图1. 基因定点突变试剂盒原理图 突变质粒中的两个nick位点可以被大肠杆菌修复，得到的克隆就会含有预期 的突变质粒了。  本试剂盒提供了DH5α甘油菌，可用于感受态细菌的制备。  本试剂盒共可以进行十次基因定点突变反应。  包装清单： 产品编号 产品名称 包装 D0206-1 BeyoFusion™ DNA Polymerase 10µl 2+ D0206-2 10×BeyoFusion™ Buffer (with Mg ) 100µl D0206-3 dNTP Mix (2.5mM each) 50µl D0206-4 DpnI 10µl D0206-5 DH5α甘油菌