香樟ISSR-PCR反应体系的正交优化.pdfVIP

第27卷 第6期 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报 Vo1．27 No．6 2007年l2月 Journal of Central South University of ForestryTechnology Dec．2007 文章编号：l673—923X(2007)06--0O44一O5 香樟ISSR—PCR反应体系的正交优化 冯 杰 。，陈香波。，李 毅 ，张德顺。 (I．甘肃农业大学 林学院，甘肃 兰州730070；2，上海市园林科学研究所，上海200232) 摘 要： 应用L9(30正交表建立了适合于樟树ISSR—PCR的优化反应体系，即20 LISSR反应体系中含有I×PCR buffer、dNTP 0．25 mmol／L、引物0．3 t~mol／I—Mg 2．0 mmol／L、Taq酶1 U和模板DNA50 ng．适宜的扩增条件为：94 C预变性4 min；94 C变性 40 S，58 C退火1 min，72 C延伸2 min，42个循环；72 C延伸10 min}4℃保存． 关键词： 香樟；ISSR标记；反应体系；正交 中图分类号：$718．46 文献标志码： A Orthogonal Optimization of ISSR-PCR Reaction System in Cinnamomum caphora FENG Jie 。CHEN Xiang-bo。，LI Yi ，ZHANG De—shun。 (1．College of Forestry，Gansu Agricultural University，Lanzhou 730070，Gansu，China： 2．Shanghai Landscape Gardening Research Institute，Shanghai 200232，China) Abstract：The optimal reaction ISSR—PCR system in Camphor was established with L9(3 )orthogonal diagram．It is a 2O L ISSR— PCR system containing 1×PCR buffer，0．25 mmol／I dNTP，0．3 vmol／L Primer，2．0 mmol／I Mg 。1 U Taq DNA po[ymerase， 50 ng template DNA and 0．5 t,g／t*I BSA．The suitable PCR procedure is one cycle denaturing at 94 C for 4 min。42 cycles each involving denaturing at 94 C for 40 S，annealing at 58 C for 1 min，extending at 72℃ for 2 rain，one cycle extending at 72℃ for 1 0 min，and then remaining at 4 C． Key words：Camphor；ISSR markers；reaction system；orthogonal 香樟Cinnamomum caphora为樟科樟属亚热带常绿阔叶乔木，主要分布在我国长江以南省区，是我国珍贵 芳香油类树种，也是南方城市重要绿化树种之一．由于其四季常绿，抗病性强，被广泛应用在城市道路两旁、公 园绿地及庭院中，极大地改善了城区生态环境．近年来，上海及周边长三角地区城市绿化中香樟黄化问题日显 突出，严重影响了城市景观，有研究认为土壤的碱性环境使得根系不能够吸收足够的铁元素从而导致黄化[1]， 然而单纯的土壤改良或向叶片喷施铁肥只能是短期效应，而选育抗黄化种质才是解决香樟黄化的根本途径之一． 简单序列重复区间扩增多态性(Inter—simple sequence repeat，简称ISSR)自1994