第章 应用.ppt

第十一章 应用 药用多糖分离与纯化 制取多糖类药物的原料十分丰富，从动植物器官组织、菌类及微生物发酵产物中可得到不同种类的多糖。 按原料来源与多糖性质的不同，分离纯化工艺不尽相同。不同的提取分离工艺也影响多糖产物的分子量和结构。 药用多糖分离 脱脂 动植物多糖或微生物胞内多糖常被脂质包围，提取前通常应先脱脂，释放多糖。常用醇或醚回流脱脂。 提取 脱脂后的残渣多用水性溶剂提取多糖。依多糖性质(如酸碱性、胞内或胞壁多糖)采用冷水、热水、冷或热的氢氧化钠、乙酸或苯酚等溶液提取。用热水提取胞内多糖结果较佳。 单用热水提取细胞壁多糖效果不甚理想，需用弱碱或酶解方法。 溶剂性质、浸提温度、时间等均影响提取效果。 用超声技术可提高多糖提取率。 提取 多糖常以与蛋白质共价结合的形式存在，有时还伴随着其他成分共存于组织中，尤其是糖胺聚糖类，多以蛋白聚糖的形式存在。 碱溶液虽可较完全地将多糖提取出来，但一些糖苷键可在提取过程中发生断裂或糖基结构发生变化。应优选碱浓度和碱解温度。 用专一性较低的蛋白酶，如链霉蛋白酶、碱性蛋白酶等降解蛋白质，释放与之结合的多糖。也可用复合酶(果胶酶、纤维素酶和蛋白酶)制剂，促使多糖从结合或共存的胶质、纤维素和蛋白质中溶出。 药用多糖分离 去除杂质 上述提取液含有无机盐、小分子有机物质和大分子蛋白质、木质素等需要除去的杂质。 工业化生产中一般采取离子交换、凝胶过滤或超滤法除去这些杂质。对于大分子杂质，可用酶法(如蛋白酶、木质素酶、果胶酶、纤维素酶等)、乙醇、丙酮溶剂沉淀法或络合物法除去。 脱蛋白质 Seveg法：利用蛋白质在氯仿中变性的特点，以正丁醇与氯仿按(4～5):1混合，混合溶液按1:5加入到多糖提取液中，混合物经剧烈振摇后离心，变性蛋自即可从水层中分出，位于水与氯仿层的界面。 三氟二氯乙烷法：将三氟二氯乙烷按1：1的比例加到多糖提取液中，搅拌后离心，蛋自质即可由水溶液转到溶剂层中。 三氯乙酸法：利用三氯乙酸沉淀蛋白质的原理，用5%--30％三氯乙酸，在低温下搅拌加入到等体积多糖提取液中，离心弃沉淀，即可达到脱蛋白质的目的。存在于溶液中的三氯乙酸经中和后，通过透析或超滤等方法除去。 酶法：用蛋白酶将蛋自质水解。再通过透析、凝胶过滤或超滤除去。是目前认为比较好的脱蛋白质方法。 等电点沉淀法逐步调节粗糖溶液pH至酸性（2～5），可以有效地去除大部分酸性蛋白质。其优点是适合于工业化生产，但宜在低温进行，以防止在酸性条件下某些基团或糖苷键破坏。 药用多糖纯化 多糖混合物→单一的多糖组分 分级沉淀法： 利用不同分子量的多糖在不同浓度低级醇或低级酮中溶解性不同的原理，逐步提高溶液中醇或酮的浓度，使不同组分的多糖依分子量由大至小顺序沉淀可达到分离目的。 实际应用时需控制好溶液中多糖的浓度。 乙醇浓度的递增幅度应根据糖混合物的性质确定。一般采用大幅度间隔(5%)。 为使多糖沉淀完全，要求溶液中有一定的离子浓度(乙酸钠，乙酸钾或乙酸铵等，浓度不超过5％)。 有些盐类，如氯化钠，在高浓度醇中溶解度降低，在醇析时有可能同时析出，可以通过反复乙醇沉淀，使多糖脱盐，也可以在乙醇沉淀前先行除去。 药用多糖纯化 盐析法：利用不同多糖与金属离子成盐后在水溶液中的特异性沉淀作用，使用硫酸铵、乙酸钾、氯化钾等盐析剂，将不同多糖逐步析出。 季铵盐沉淀法 酸性多糖在溶液中以聚阴离子形式存在，与碱性表面活性剂长链季按盐(如CTAB)或其碱形成水不溶性络合物而沉淀。 配制成1%～10%的水溶液，或溶解于与多糖溶液相同浓度的盐溶液中。 此法要求溶液中多糖浓度在0.1％～1％为宜。 加季按盐后，逐步以水稀释，使不同的多糖组分依次沉淀出来；或者选择某一特定的起始盐浓度，使某一组多糖先行沉淀下来，另一组留在溶液中，再通过醇析法回收。 药用多糖纯化 纤维素柱层析法 与分级沉淀相反，利用不同多糖在不同浓度乙醇中溶解性不同的特点，先用4倍体积的乙醇将混合多糖溶液沉淀在惰性的多孔纤维素柱上，再按由高至低的顺序，用不同浓度的乙醇洗脱，将不同多糖分开。 也可根据季铵盐络合法同样的原理，将其用于制备目的的柱层析法。即将多糖混合溶液加至预先经季铵盐溶液处理的纤维素柱上，使之形成络合物沉淀，再以逐步递升浓度的盐溶液，同时改变pH，进行分级洗脱，达到纯化的目的。 药用多糖纯化 离子交换层析法 利用不同多糖分子电荷密度不同，而与离子交换剂中的离子或某些基团发生电性结合。 其亲和力随多糖结构与电离性质而异， 一般随分子中酸性基团的增加而增强， 线状分子、分子量较大的多糖亲和力较强， 支链多糖较直链多糖更易吸附。 而后使用不同浓度的盐溶液取代多糖离子，便能获得不同级分的多糖。 常用离子交换剂有树脂类、纤维素类和葡聚糖类等。 纯化 金属络合物法 不同多糖能与铜、钙、铁、铅等金属离子形成络合物