响应面分析法优化多功能菌B1514的产孢工艺.pdfVIP

— 184 — 江苏农业科学 2016年第44卷第8期 金京京,齐永志,常 娜,等 响应面分析法优化多功能菌B54 的产孢工艺[J] 江苏农业科学,206,44(8): 84 87,94 do :0 5889/j ssn 002 302 206 08 050 响应面分析法优化多功能菌B1514 的产孢工艺 金京京,齐永志,常 娜,张雪娇,甄文超 (河北农业大学植物保护学院,河北保定0700 ) 摘要:为研究多功能菌B1514 的最佳产孢工艺,为其扩培 制剂的储存及使用提供参考,首先测定多功能菌B1514 的生长曲线以初步确定其培养时间,然后采用单因素试验对影响多功能菌B1514产孢的接种量 初始pH值 装液量 转速 发酵温度和接种种龄6个因素进行筛选,筛选出具有显著性影响的主效应因素,再通过中心组合设计和响应面 分析试验,以芽孢数量为响应值确定各显著影响因子的最佳水平,最后利用自动玻璃发酵罐对优化所得最佳培养条件 进行验证 结果表明,最佳产孢工艺为接种量6%,初始pH值7.6,三角瓶装液量80mL/500mL,转速235r/min,发酵 9 温度36.5℃,接种种龄24h,培养时间36h,经验证芽孢数量达8.19×10 CFU/mL,较优化前增加49% 关键词:响应面分析;多功能菌;产孢工艺;优化 中图分类号:S435.1 文献标志码:A 文章编号:1002 1302(2016)08 0184 04 近年来,在中国北方秸秆还田地区小麦土传病害呈逐年 10g 氯化钠 10 g,加蒸馏水补足至 1000 mL 发酵培养 加重发生趋势,已成为制约小麦高产 优产的重要因素之 基 :葡萄糖3g 淀粉5g 豆粉15g 玉米粉20g 酵母浸膏8 一 1 目前一般采用化学药剂拌种或喷雾进行防治,但化学 4g 硫酸铵 1g 硫酸镁 0.2 g 硫酸锰 0.2 g 磷酸氢二钾 农药存在污染环境 降低粮食安全性和易导致病原菌产生抗 5.4g 磷酸二氢钾 2.0 g 碳酸钙 1.0 g,加蒸馏水补足 药性等不足 因此,以绿色木霉 芽孢杆菌和假单孢菌等为功 至 1000mL 能菌的生物制剂应用越来越受到人们的重视2 3 1.2 方法 为解决资源利用和病害防控问题,笔者所在研究室从多 1.2.1 测定生长曲线初步确定培养时间 用自动玻璃发酵 年秸秆还田土壤中分离到 1株多功能枯草芽孢杆菌Bacillus 罐进行培养,装料系数0.6(12L),培养温度32℃,通气量 subtilis B1514 该菌株不仅对小麦土传病害有较好防治效 0.5m /h,搅拌转速200r/min,溶氧(DO)量保持在75%左3 10 果,还能快速腐解玉米秸秆,并能通过腐解秸秆获得营养而快 右,每隔3h取样染色观察芽孢形成情况 ,用无菌水分别 速繁殖4 梁春启等前期已明确该菌株的发酵条件并研制 配制成稀释 10 10 10 10 10 10 倍菌悬液,无菌条件下2 3 4 6 出土壤添加剂AD 1 AD 5 和B1514 片剂3 种剂型,虽然 吸取20μL菌悬液,采用稀释平板法在LB培养基上测定菌体 6 9 11 田间应用效果较好 ,但是在工业生产过程中仍存在芽孢 数量