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中华眼镜蛇镇痛成分najanalgesin对脊髓星形胶质细胞磷酸化p38MAPK表达的影响 中华眼镜蛇镇痛成分najanalgesin对脊髓星形 MAPK表达的影响 胶质细胞磷酸化p38 硕士研究生：张翠兰 专 业：药理学 方 向：神经系列化药理 导 师：赵树进教授 中文摘要 蛇毒是由蛇的毒腺分泌的多种组分构成的复杂混合物，属于生物毒素。根据 蛇毒的不同组分及产生的不同生物效应，可将蛇毒分为蛇神经毒素、心脏毒素、 肌肉毒素、细胞毒素以及系列酶类【11。我国的蛇类资源十分丰富，其中具有剧毒 且危害较大的有10余种，即眼镜蛇、眼镜王蛇、金环蛇、银环蛇等【2，3J。早在19 世纪初就已证明蛇毒具有镇痛作用14】。后来大量数据显示，蛇毒具有镇痛作用， 而产生镇痛作用的成分主要是蛇毒中的神经毒素成分，且其镇痛作用具有镇痛时 间长，无成瘾性、耐药性及用量少等特点，对顽固性神经性疼痛亦有效【5一。蛇 毒神经毒素还具有诱导不同细胞凋亡的作用【7，引。蛇毒的另一重要的成分为心脏 毒素，它是由58．60个氨基酸组成，具有溶血、细胞毒性、以及肌肉去极化等药 理学功能。其对肿瘤细胞特别是恶性肿瘤显示较好的溶解作用，可能成为一个极 具潜力的抗肿瘤药物【9】。本课题组其他成员已经成功地从中华眼镜蛇中提取分离 了一种心脏毒素najanalgesin，并首次通过大鼠神经性疼痛模型实验证实了 najanalgesin的镇痛作用，脊髓的阿片受体以及M受体参与介导其镇痛作用；后来 MAPK表达的影响 中华眼镜蛇镇痛成分najanalgesin对脊髓星形胶质细胞磷酸化p38 大。 而且已有数据显示，脊髓的星形胶质细胞在慢性疼痛方面扮演重要的角色可 o‘111。 能通过p38．MAPK系统产生的【1 因此，本研究主要目的是：在细胞水平探讨中华眼镜蛇成分najanalgesin的 镇痛作用与脊髓星形胶质细胞p38 镇痛作用机制，最终为中华眼镜蛇成分najanalgesin的临床研究提供理论依据， 提高疼痛治疗的有效性、安全性和经济性。研究共分为以下三个部分。 一、SD大鼠原代脊髓星形胶质细胞培养模型的建立和验证 目的：建立SD大鼠原代脊髓星形胶质细胞培养模型，为下一步药物诱导实验提 供一定数量的正常细胞并摸索药物干预实验的药物浓度。 方法：参照McCARTHY建立的方法，并与差速贴壁法和阿糖胞苷方法比较后， 成功建立了简单易行而且经济的大鼠原代脊髓星形胶质细胞培养模型。胎盼蓝染 色后观察存活率，记录细胞数量。并采用免疫细胞荧光化学法对星形胶质细胞的 特异性标记物GFAP进行标记鉴定纯度，激光共聚焦观察并摄像记录，计算原代 培养的纯度。M订法测定不同浓度梯度药物najianalgesin孵育细胞后的OD值， 根据najanalgesin对细胞的增殖抑制作用数据确定进行药物诱导实验的浓度。 结果： 1．SD大鼠原代脊髓星形胶质细胞存活率在75％．85％。每6只出生1．3天的SD 大鼠能够得到2-4×106个细胞；免疫细胞荧光化学法鉴定细胞纯度均为98％以 上，培养所得的星形胶质细胞产率和纯度理想。 度为0．01．10 I_tg／rra时，其对细胞的毒性以及增殖作用均与空白组相当；当药物 浓度大于10 以及增殖抑制作用都增大。 Ⅱ MAPK表达的影响 中华眼镜蛇镇痛成分najanalgesin对脊髓星形胶质细胞磷酸化p38 结论：采取了简单易行而且经济的方法，成功建立SD大鼠原代脊髓星形胶质细 胞培养模型，可为下一步的实验提供一定数量的正常细胞。选择采用2u咖l浓 度的najanalgesin与细胞共同孵育，进行药物诱导实验。 的影响 IL-113的影响 方法：将细胞接种到24孔板中，无血清DMEM、LPS(2