中药肝复康对肝纤维化大鼠MAPK-AP-1信号通路表达影响.pdfVIP

中药肝复康对肝纤维化大鼠MAPK／AP．1 信号通路表达的影响 博士研究生：娄晶磊 指导教师：贾玉杰 教授 专业名称：病理学与病理生理学 摘 要 研究背景和目的： 肝纤维化是肝损伤后的修复反应，主要特征为肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)活化及细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)过 度沉积。早期肝纤维化是可以逆转的，因此对肝纤维化早期始动机制的 研究具有重要意义。活化蛋白．1(activeprotein．1，AP．1)是一种与组织纤 维化密切相关的转录调控因子，它可以在转录水平调节胶原基因的表达； growth 还可以调控转化生长因子．9l(transforming inhibitormetal 组织基质金属蛋白酶抑制剂．1(tissue 等促纤维化细胞因子的表达。可见AP．1是一种与ECM合成、降解密切 相关的转录因子。然而目前对AP．1在肝脏纤维化中的表达研究尚少，对 于AP．1在肝脏纤维化进程中介导细胞外基质表达的分子机制亦不十分 清楚。 derived factor，PDGF)是已知 血小板衍生生长因子(plateletgrowth 最强的HSCs有丝分裂剂。PDGF通过与其受体(PDGF 结合启动下游蛋白的级联磷酸化反应来发挥生物学效应。近年来对 PDGF／PDGFR的信号转导途径有许多新的发现。有研究表明，在人肾小 合活性。但目前对PDGF．BB信号通路在肝纤维化体内实验中与 MAPK／AP．1信号通路的关系尚无明确报道。 本研究采用CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型，观察：1)中药肝复康对 肝纤维化大鼠肝功能和肝组织形态学的影响：2)肝复康对AP．1在肝纤 号通路在大鼠肝纤维化模型中的关系及肝复康对二者表达的影响。 方法： SD大鼠，随机分为正常对照组、12周模型组(1 2w)、20周模型组 (20w)、肝复康高、中、低剂量治疗组和预防组。除正常对照组，其余 组大鼠皮下注射以橄榄油稀释的10％的CCl4(0．5mg-kg。)，每周2次，共 l2周；正常对照组注射同体积CCl4溶媒。肝复康预防组从CCl4注射第1周 12．5 开始，给予肝复康(3 复康预防组处死。肝复康高、中、低剂量组从CCl4注射第9周开始，分别 周末，将20w模型组和肝复康高、中、低剂量治疗组处死。采集大鼠血 及肝组织。赖氏法测血清ALT和AST活性；溴甲酚绿比色法测白蛋白；考 马斯亮蓝比色法测球蛋白。HE染色观察肝组织形态结构变化。双盲法采 用Ishak评分系统对肝脏纤维化程度进行组织学评估。 蛋白在肝组织的表达；逆转录．聚合酶链反应(reverse transcription chain polymerase shift 分析(Electrophoreticmobility 活性；免疫蛋白印记(Western 准差(殛S)表示，采用SPSS统计软件。组间比较采用方差齐性检验，作 单因素方差分析。p0．05表示差异有显著性。 本研究结果如下： 1．肝复康对肝纤维化大鼠肝功能和肝组织形态学的影响 HE染色肝组织病理切片结果显示，与正常组相比，12w和20w肝 纤维化模型组肝组织结构破坏：假小叶形成、纤维间隔不规则增厚、肝 细胞脂肪变性和大量炎症细胞浸润；肝复康预防组，炎症细胞浸润、肝 细胞脂肪变性和纤维化得到显著改善；肝复康高、中、低剂量治疗组的 肝纤维化均有不同程度改善，中剂量组(31 2．5mg／kg／d